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《豬ghrelin基因真核表達載體的構(gòu)建及其表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、ConstructionofSwineGhrelinEukaryoticExpressionVectoranditsExpressionThesissubmittedtoQngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyCaoYue-sheng(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．SunJin—haiQingdao．ChinaJune，201
2、2獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。啾虢髫碼紅帆年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學可以用不
3、同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)啾齠鍺確導師簽名：乳毛煬時間：年月日時間：年月日青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要豬Ghre1．n基因真核表達載體的構(gòu)建及其表達摘要培育節(jié)糧瘦肉型轉(zhuǎn)基因豬需要選擇生長相關(guān)的基因構(gòu)建表達載體，本研究選取生長激素釋放肽Ghrelin基因作為目的基因，其Ghrelin屬于生長激素促釋放激素受體(GHS-R)的內(nèi)源性配體，通過與其受體結(jié)合，能夠促進生長激素(GH)的釋放，而且Ghrelin在調(diào)節(jié)能量平衡、增強胃功能以及增強免疫力方面都呈現(xiàn)出重要的效應(yīng)。本研究首先從20日齡的長
4、白豬十二指腸組織中提取總RNA，根據(jù)Genbank(序列號：DQ355969．1)提供的GhrelincDNA序列，設(shè)計帶有NheI和HindIII酶切位點的引物，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)，然后將該基因片段重組于無多酶切位點的T載體上，構(gòu)建pMI)-Ghrelin質(zhì)粒，多次測序，選取克隆完整的DNA片段，用于構(gòu)建pEGFP-Ghrelin重組質(zhì)粒。同時利用PCR擴增技術(shù)、酶切與電泳及基因測序的方法對重組質(zhì)粒進行鑒定。然后，pEGFP-Ghrelin重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成纖維細胞，觀察熒光蛋白的表達。結(jié)果如下：1．通過RT-PCR技術(shù)獲得了G
5、hrelin的cDNA序列，并應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建了pEGFP—Ghrelin重組質(zhì)粒，同時通過PCR擴增和雙酶切均得到大小為357bp左右的目的片段，經(jīng)測序鑒定重組質(zhì)粒含有完整的Ghrelin的CDS序列片段．2．重組質(zhì)粒(pEGFP--Ghrelin)轉(zhuǎn)染成纖維細胞，得到表達綠色熒光蛋白的細胞，表明真核表達栽體pEGFP-Ghrelin構(gòu)建成功．關(guān)鍵詞：生長激素釋放肽；真核表達載體；綠色熒光蛋白；反轉(zhuǎn)錄PCR青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文ConstructionofSwineGhrefinEukaryoticExpressionVectoranditsE
6、xpressionAbstractInordertonurtureDewvarietiesof[弘tn-savingfoundationandleanswine，thestudyconstructedexpressionvectorofgrowthrelatedgene．ThestudyselectedGhrelingenesaspurposegene．Ghrelinwasfillendogenouslegendofgrowthhormonetopromotehormonerelease．nr01】ghitsreceptor,Ghrelincoulds
7、u-ongstimulatethereleaseoftheGHandpromotetheanimalfeedintake．Ghrelinplayedanimportantroleon刪ateenergybalanceandinenhancingthegas研cfunctionandimmurliry,too．Thes吣dyextractedtotalRNAfromtheduodenaltissueof20daysoldlandrace．AccordingtothegeneticsequenceofGhrelincDNA(theloginnumberof
8、Genbankwas：DQ355969．1)’designedtheprimerwithgen
