dha聯(lián)合去甲斑蝥素抑制人胃癌細(xì)胞bgc-823增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名：是數(shù)字導(dǎo)師簽章穆二級學(xué)院妊蓋章：j易渺年了月乞陽L河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特YlmJ!ln以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他

2、人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：曼丞哥導(dǎo)師虢襁≯臚年?月2產(chǎn)日目錄中文摘要???????????????????????????．．1英文摘要???????????????????????????．4研究論文DHA聯(lián)合去甲斑蝥素抑制人胃癌細(xì)胞BGC．823增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究前言???????????????????????????????．．7日O舀?????????????????????????????????????。7材料與方法?????????????????????????8結(jié)果????

3、??．??????????????????????????????15附圖???????????????????????????．17討論????????????????????????????????????．24結(jié)論????????????????????????????????????．28參考文獻(xiàn)?????????????????????????．29綜述DHA及去甲斑蝥素體外抗胃癌細(xì)胞研究進(jìn)展????????．．32致謝?????????????????????????????40個人簡歷???????????????????????????41中文摘要DI

4、tA聯(lián)合去甲斑蝥素抑制人胃癌細(xì)胞BGC．823增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究摘要目的：研究DHA聯(lián)合去甲斑蝥素體外抗胃癌細(xì)胞作用。方法：1實驗分組：根據(jù)預(yù)實驗和文獻(xiàn)報導(dǎo)用RPMll640培養(yǎng)基配置4組DHA，終濃度分別為(10、20、30、50mg／mL)，空白組為等體積培養(yǎng)基，對照組為不加處理的細(xì)胞，用RPMll640培養(yǎng)基配置4組用DMSO溶解后的去甲斑蝥素，終濃度為(5、10、20、401．tg／mL)，得出各藥的半對數(shù)抑制濃度(ic50)值，選用均低于單藥IC50值的DHA(30mg／mL)聯(lián)合去甲斑蝥素(Srtg／mL)，對照組加入含無水乙醇(

5、DMSO(

6、處于貼壁生長細(xì)胞用0．25％胰蛋白酶混合0．02％EDTA消化，然后利用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，用1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為lx105個／mL，分裝到96孔平底型培養(yǎng)板，每孔加液量1001JL，繼續(xù)培養(yǎng)24h，使細(xì)胞呈單層貼壁且處于對數(shù)生長期。根據(jù)實驗分組設(shè)計加藥，繼續(xù)培養(yǎng)24h，終止反應(yīng)時每孑LJJn濃度為2mpTmL的MTT10此，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加二甲基亞砜150止，酶標(biāo)儀振蕩器搖振10min以使甲瓚產(chǎn)物充分溶解。在波長490nnl條件下嚴(yán)格測定彳值。其中細(xì)胞抑制率計算公式為：(實驗縱值／對照縱值)x100％。5流式細(xì)胞檢測：細(xì)胞樣品制備：收集24h實驗組細(xì)

7、胞1×105個／mL，中文摘要以冰0．01％PBS洗滌細(xì)胞2次，重懸于700mL／L預(yù)冷乙醇固定，PI一步法染色，流式細(xì)胞儀檢測亞二倍體峰的比例并擬合細(xì)胞周期曲線；PI雙標(biāo)記法檢澳1]bcl．2凋亡蛋白，蛋白含量以平均熒光強度表示，平均熒光強度=[19(X—Mode)]x340。結(jié)果：1NADH酶組織化學(xué)染色對照組細(xì)胞呈正常伸展?fàn)顟B(tài)，染色顆粒均勻，胞核規(guī)則圓形，位于細(xì)胞中央，核膜清楚。經(jīng)DHA聯(lián)合NCTD治療后，可見細(xì)胞裂解，胞核分裂、胞膜邊界清的凋亡小體，細(xì)胞體積縮小，形態(tài)不一，胞質(zhì)顆粒深染，密度增加。核膜核仁破碎，結(jié)構(gòu)更加緊密，細(xì)胞核固縮呈均一的