microrna21在胃癌中的作用及相關(guān)機制研究

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1、萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文論文題目:叢iQ[Q8堂至!查置疸生的佳屢壁相差扭劍籃窒答辯委員會主席:答辯委員會成員:萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要英文摘要前言目錄一1—3—6—9181920303335第一部分人胃癌細胞株全基因組miRNAs表達譜特征材料方法二結(jié)果三討論四小結(jié)第二部分早期胃癌特征性miRNAs芯片篩選材料方法二結(jié)果一三討論一四小結(jié)一第三部分miR一21在胃癌組織中的表達水平及臨床意義研究材料結(jié)果討論小結(jié)方法36434648四部分在組織水平初步探討miR-21促進胃癌進展的分子機制49、胃癌組織中miR-21上調(diào)與RECK/MMP2/MMP9及MMPl4m

2、RNA表達平的相關(guān)性研究一材料方法49二、O同E7癌組織中miR一21上調(diào)與RECK/MMP2/MMP9及MMPl4蛋白表達水平的相關(guān)性研究材料方法結(jié)果討論小結(jié)54607276第五部分在細胞水平探討miR-21促進胃癌進展的分子機制~77一、miR-21在5株胃癌細胞中的表達77一二三四第一水一萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文材料方法二結(jié)果三討論二、細胞功能實驗材料方法二結(jié)果三討論四小結(jié)77828384879293第六部分胃癌患者循環(huán)miR-21檢測及臨床意義價值研究?一94材料方法二結(jié)果一三討論一四小-結(jié)一全文總結(jié)參考文獻附錄一9410110410610710812121416123

3、論文發(fā)表及參與課題情況致謝綜述:胃癌中微小RNA相關(guān)研究進展學位論文獨創(chuàng)性聲明萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文MicroRNA21在胃癌中的作用及相關(guān)機制研究中文摘要研究背景及目的:胃癌是世界高發(fā)惡性腫瘤之一,其發(fā)病率高、惡化快、轉(zhuǎn)移早、預后差,根治性手術(shù)機會少,5年生存時間短。隨著現(xiàn)代醫(yī)學的不斷發(fā)展,胃癌在手術(shù)、新輔助化療等綜合治療下,5年生存時間得到一定的提高,但是仍然嚴重威脅著患者的生命健康及生活質(zhì)量。因此,對胃癌發(fā)病機制的研究,并尋找早期診斷、療效及預后評估的標記物是亟待解決的問題。微小RNA(microRNA,miRNA)由22--一25個核苷酸構(gòu)成的內(nèi)源性豐富的單鏈非編碼R

4、NA,它通過抑制mRNA翻譯和(或)促進mRNA降解來調(diào)控蛋白的表達。胃癌的發(fā)生、發(fā)展是個多步驟多因素的演變過程,大量的研究證實microRNAs的異常表達在其發(fā)生、發(fā)展中也起著一定的作用。RECK(reversion—inducing—cysteine—richproteinwithkazalmotifs)作為抑癌基因,最重要的作用是對基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的抑制作用,而且已經(jīng)證實其與腫瘤轉(zhuǎn)移及浸潤相關(guān)。本次實驗旨在系統(tǒng)研究miR-21在胃癌中的作用機制。材料方法:①采用昂飛人全基因組表達譜芯片檢測胃癌細胞株AGS中miRNAs表達情況。②CancerMicroRNAsArray

5、檢測胃癌細胞株AGS及組織中miRNAs表達情況。③采用TaqManRealTimePCR方法進一步檢測miR一21在40例健康人、48例慢性萎縮性胃炎患者、37例胃不典型增生患者及60例胃癌患者中表達水平,RECK/MMP2/刪P9/MMPl4在60例胃癌組織及配對的癌旁正常組織中的表達倍數(shù)。④采用Wb(westernblot)及免疫組化方法對RECK/MMP2/刪P9/刪P14在胃癌組織中的蛋白表達水平檢測。應用細胞轉(zhuǎn)染方法,探討miR~21的可能作用機制。⑤采用TaqManRealTimePCR方法檢測40例健康人、48例慢性萎縮性胃炎患者、37例胃不典型增生患者及60例胃癌患者

6、外周血中miR一21的表達水平。結(jié)果:@miR-21在兩種芯片中呈高表達;②組織驗證結(jié)果顯示miR一21在60例胃癌組織中呈現(xiàn)高表達,miR-21高表達與淋巴浸潤、靜脈侵犯、T、N及臨床分期有關(guān),P均<0.05。miR-21在健康人胃組織中、慢性萎縮性胃炎組織中及不典型增生患者胃組織中的表達倍數(shù)低于胃癌患者組織內(nèi)的表達倍數(shù);miR-21在早期胃癌中的表達倍數(shù)要低于晚期胃癌組織中的表達倍數(shù)。隨著病變程度的不斷加深,miR-21的表達倍數(shù)也在不斷的升高,尤其是在胃癌的晚期。miR-21的高表達對胃癌患者的生存預后也產(chǎn)生一定的作用。無論在早期還是晚期胃癌組織中,在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中,

7、RECK的mRNA水平均較刪P2/刪P9/刪P14萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文的mRNA水平低。③wb實驗結(jié)果可以看出REcK/刪P2/刪P9/MMPl4蛋白在癌組織中的蛋白水平高于癌旁正常組織中的蛋白水平。60例胃癌組織RECK/腳P2/刪P9/刪P14免疫組化結(jié)果,RECK在胃癌組織中陰性及弱陽性率分別為98.3%、1.67%,強陽性率為0,而在癌旁正常組織中的陰性及弱陽性率分別為0、3.30%,強陽性率為96.7%。MMP2在胃癌組織

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