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1、福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文sfrp3表達(dá)下調(diào)對(duì)小鼠牙齒發(fā)育的影響姓名：林燕燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：張彥定20060401摘要器官發(fā)育的形態(tài)發(fā)生過(guò)程中，Wnt家族信號(hào)是調(diào)節(jié)上皮和間充質(zhì)之間相互作用的重要生長(zhǎng)因子之一，在果蠅(Drosophila)和秀麗隱桿線蟲(chóng)(Caenorhabditiselegans)的巡化，學(xué)刪究．惻，H蜘蜍(Xenopus)的H1化圳期表達(dá)研究和小鼠的基因敲除實(shí)驗(yàn)中都證明了Wnt家族與胚胎的分節(jié)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的圖示形成(CNSpatterning)和細(xì)胞不對(duì)稱分化的調(diào)控有關(guān)。wnt信號(hào)系統(tǒng)也是調(diào)節(jié)牙齒發(fā)育的四大類生
2、長(zhǎng)因子之一．sFRP(secfetedFizzled．relatedprotein)是Wnt信號(hào)的調(diào)控因子，本論文通過(guò)抑制sfrp3的表達(dá)，研究Wnt信號(hào)在牙齒發(fā)育過(guò)程中所起的作用。利用RNAi技術(shù)和慢病毒轉(zhuǎn)基因技術(shù)，設(shè)計(jì)針對(duì)sfrp3的siRNA，構(gòu)建表達(dá)shRNA的pNL-EGFP—U6一shsfrp3-I和口NL—EGFP，U6．shsfrp3．II質(zhì)粒，使它們分別和pVSVG,pHelper組成慢病毒三質(zhì)粒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，再共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，生產(chǎn)EGFP-shsfrp3一I病毒和EGFP—s№^p3-II病毒。用EGFP．sh@p3．I病毒和EGFP。
3、shsfrp3。II病毒分別感染牙間充質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)ReaRimeRT-PCR方法檢測(cè)各個(gè)組織的sfrp3的相對(duì)表達(dá)量，篩選出抑制效率為63％的EGFP．shsfrp3一II病毒應(yīng)用于研究牙齒發(fā)育。實(shí)驗(yàn)結(jié)果是：感染EGFP-stuJ}p3-11病毒的重組牙J垤(El3．5牙叫充質(zhì)+EIO．5牙上皮)的成牙率降低。感染EGFP-shsfrp3-II病毒的E11．5整牙的早期發(fā)育過(guò)程會(huì)被促進(jìn)。這些結(jié)果都證明了wm家族信號(hào)系統(tǒng)在牙齒早期發(fā)育中具有重要的作用。關(guān)鍵詞got、sfrp3、RNAL、RealtimeRT—PCR、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、慢病毒載體系統(tǒng)、牙齒發(fā)育Abs
4、tractWritextracellularsignalingmoleculeshaveessentialrolesinepithelial-mesenchymalinteractionsinvolvedintissuemorphogenesis．GeneticstudiesinDrosophilaand’Caenorhabditiselegans,ectopicgeneexpressioninXenopus，andgeneknockoutsinthemousehavedemonstratedtheinvolvememofWnrainprocessesas
5、diverseassegmentation,CNSpatterning,andcontrolofasymmetriccelldivisions．Wntssigrlalisoneofthefourgrowthfactorsthatregulatethetoothdevelopmemt．SFRPs(secretedFizzled—relatedproteins)arereceptorsthatdirectlybindtoWnts．Inthisresearch，weinvestigatetheeffectsofWntssignalontoothdevelopme
6、nt，andwefocusonthesfrp3whichisoneofthesp,familymembers．WeuseRNAiandlentiviraigenetransfertechniquetoknockdowntheexpressionofsfrp3intoothmcscnchyme．PlasmidsofpNL-EGFP-U6-sh茸—，p了-Iand11whichexpressedshRNAwereconstructedandcombinedwithpVSVGandpHelper,respcectively,tOconstituteLentivi
7、ralvectorsystemofthreeplasmids．TheLentiviralvectorsystemWaStramfeetedinto293TcelltoproduceEGFP-shsfrp3-IandEC求p-shsfrp3一IIlentivirus．ToothmesenchymalcellsweTeinfectedbybothlentivirusesandidentifiedbyReahimeRT-PCRtoexamineinhibitoryefficency．nlcEGFP·s叼印孓IIlentivirnswhichCaninhibit6
8、3％oftheexpressionofsfrp3Wasselect
