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《激素對小鼠胚胎體外發(fā)育的影響論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、激素對小鼠胚胎體外發(fā)育的影響論文.freelformouseembryoculture,andtheeffectsoftoneonmousepreimplantationembryosinvitroouseembryosediatodeterminetheoptimasystem,andthendifferentconcentrationhormoneediumtoobservetheeffectofhormoneonmouseembryodevelopmentinvitro.HTF+10%FBSmediumofmousepre
2、implantationembryodinviting.Afterhormoneofdifferentconcentrationsandkindsedium,thedevelopmentrateofdifferentstagesembryosdeclinesparedonecoulddepressdevelopmentofmousepreimplantationembryosinvitro,andlessensthedevelopmentalproportionofdifferentstageembryos,.freelone;
3、mousepreimplantationembryos;developmentinvitro;effects早期胚胎體外培養(yǎng)技術(shù)在發(fā)育生物學(xué)、胚胎移植、轉(zhuǎn)基因動物等領(lǐng)域的研究工作中都有很重要的作用1。早期胚胎發(fā)育是一個復(fù)雜的過程,在此過程中,可受到各種激素的影響,激素通過不同途徑來調(diào)控早期胚胎發(fā)育2,3。目前,在不孕治療中經(jīng)常使用到各種促排卵激素,在孕婦妊娠期間也經(jīng)常使用一些激素類藥物,有報道,使用不同劑量和不同種類的激素,可能影響到胚胎的質(zhì)量4-7。另外,環(huán)境中也存在著多種激素的類似物,這些激素和激素類似物對胚胎發(fā)育的影響研究
4、,目前還缺乏系統(tǒng)性,尤其是較高濃度的激素水平如何影響胚胎的發(fā)育、胚胎發(fā)育與激素的濃度之間是否存在著劑量依存性、同種激素對不同發(fā)育階段的胚胎的影響等,這些都還不十分明了,很有必要進行深入的研究。本研究旨在以小鼠為試驗動物模型,在基礎(chǔ)胚胎發(fā)育培養(yǎng)液中分別加入不同種類和不同濃度的激素,以探討其對鼠早期胚胎體外發(fā)育的影響機理。1材料與方法1.1試驗試劑孕馬血清促性腺激素(PMSG)和人絨毛膜促性腺激素(HCG)購自寧波第二激素廠,HTF培養(yǎng)液購于美國In-Vitro公司,透明質(zhì)酸酶購自Vitrolife公司,BSA粉劑購自BovomaX
5、公司,FBS(胎牛血清)購自Gibco公司。胚胎操作液配制:CZB-HEPES(NaCl為478.9mg/100mL,KCl為36.3mg/100mL,KH2PO4為15.9mg/100mL,MgSO4為14.195mg/100mL,NaHCO3為210.0mg/100mL,C6H12O6為100.0mg/100mL,CaCl2·2H2O為25.0mg/100mL,乳酸鈉(60%糖漿)為370mg/100mL,鏈霉素為50mg/100mL,青霉素為60mg/100mL,HEPES為238.0mg/100mL)。使用時,添加BSA
6、粉劑4mg/mL,過濾除菌,使用前加溫,用于體外胚胎的收集和清洗操作。1.2試驗動物及處理昆明品系性成熟小鼠,6～8周齡,購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心,飼養(yǎng)于光照控制(10L∶14D)、恒溫恒濕的飼養(yǎng)室,自由采食飲水。雌鼠于17∶30左右腹腔注射10IU孕馬血清促性腺激素(PMSG),48h后腹腔注射10IU人絨毛膜促性腺激素(HCG),HCG注射后與正常雄鼠按1∶1比例合籠,次日清晨檢查有無陰栓。有陰栓者于注射HCG后14～21h采用頸椎脫臼法處死小鼠。1.3胚胎收集取出輸卵管移入操作液,在體視顯微鏡下找到輸卵管膨大部,劃破
7、輸卵管膨大部使受精卵(云霧狀)游離出來。用槍頭吸出卵團,移入含透明質(zhì)酸酶的液滴中反復(fù)吹打,鏡下觀察,當受精卵游離出來后,用移卵管(自制巴氏管)吸出來移入新液滴內(nèi)清洗3次,備用。1.4試驗分組與胚胎培養(yǎng)1.4.1檢查通過2-細胞阻滯情況。收集洗凈的胚胎,選擇形態(tài)較好的受精卵分為2組,分別置于HTF+10%FBS和HTF+4mg/mLBSA培養(yǎng)液小滴中。于37℃、5%CO2、95%空氣、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24h后觀察2-細胞發(fā)育情況并做好記錄。1.4.2檢查培養(yǎng)體系。收集洗凈的胚胎,選擇形態(tài)較好的受精卵分為多組,分別置于HTF
8、+10%FBS培養(yǎng)液小滴中。于37℃、5%CO2、95%空氣、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每24h觀察1次,并記錄各發(fā)育階段胚胎數(shù)目。1.4.3激素對胚胎發(fā)育的影響。選擇形態(tài)較好的受精卵分為多組,分別置于添加100、50、10IU/mL的HCG和100、50、10I
