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《雞傳染性支氣管炎病毒rt-pcr快速檢測(cè)方法的建立》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)2011,27(03):342-346ChineseAgriculturalScienceBulletin雞傳染性支氣管炎病毒RT-PCR快速檢測(cè)方法的建立1111112劉金朋，商艷紅，陳紅英，王淑娟，王子馨，王亞丹，師麗剛（1河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州450002；2洛陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南洛陽(yáng)471002）摘要：根據(jù)雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）N基因序列（FJ767920），利用引物軟件Premier5.0，設(shè)計(jì)并合成了1對(duì)特異引物，通過RT-PCR擴(kuò)增條件的優(yōu)化，建立了一種快速檢測(cè)IBV的
2、RT-PCR方法。應(yīng)用該方法成功地從IBVM41和河南株HN99中擴(kuò)增出318bp的目的片段，而傳染性喉氣管炎病毒、新城疫病毒及馬立克病毒基因組均未擴(kuò)增出相應(yīng)的片段。將回收的RT-PCR產(chǎn)物克隆到pGEM-TEasy載體后測(cè)序，進(jìn)一步證實(shí)RT-PCR檢測(cè)方法的特異性。對(duì)IBV的最低檢出量為0.6pg的cDNA。經(jīng)初步應(yīng)用表明，該方法的建立為IBV的早期診斷和臨床檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：雞傳染性支氣管炎病毒；RT-PCR；檢測(cè)中圖分類號(hào)：S855.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A論文編號(hào)：2010-2929DevelopmentofRT-P
3、CRforRapidDetectionofInfectiousBronchitisVirus1111112LiuJinpeng,ShangYanhong,ChenHongying,WangShujuan,WangZixin,WangYadan,ShiLigang(1CollegeofAnimalHusbandryandVeterinary,HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002;2LuoyangCenterforAnimalDiseasesControlandPrevent
4、ion,LuoyangHenan471002)Abstract:Apairofprimerswasdesignedaccordingtoaconservedregionofinfectiousbronchitisvirus(IBV)Ngene(FJ767920),reversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR)forrapiddetectionofIBVwasdevelopedbyoptimizingamplificationconditionssuchasconc
5、entrationsofprimersforRT-PCR.A318bpfragmentwasamplifiedfromIBVM41strainandNephropathogenicIBVHN99strain,respectively,butnotfrominfectiouslaryngotracheitisvirus,NewcastlediseasevirusandMareksdiseasevirus.ThisamplifiedfragmentwasclonedintopGEM-TEasyvectorandsequenc
6、ed.TheresultshowedthatthisamplifiedfragmentwasspecificforIBVcDNA.ThismethodcoulddetectthetemplatecDNAof0.6pgforIBV.ClinicaldetectionofIBVbyRT-PCRshowedthatthisimprovedRT-PCRapproachcouldbeafast,simpleandspecificdetectionmethodforIBV.Keywords:infectiousbronchitisv
7、irus;RT-PCR;detection0引言病變而引起死亡，死亡率一般為20%~30%，有時(shí)高達(dá)雞傳染性支氣管炎（Infectiousbronchitis，IB）是由40%~90%。產(chǎn)蛋雞感染則使產(chǎn)蛋量下降，蛋品質(zhì)降雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起雞的一種急性、高低，還可導(dǎo)致感染的肉雞生產(chǎn)能力下降，使雞的增重和[1]度接觸性、呼吸道傳染病。迄今為止，IBV感染已有飼料報(bào)酬降低，死淘率增加。自1930年在美國(guó)北達(dá)科[2][3]呼吸型、腎型、腺胃型、腸型等多種致病型，其中還有他州發(fā)現(xiàn)該病以來，現(xiàn)已遍及世界各地。中國(guó)在2
8、0[4]一些變異的中間體，IBV主要侵害雞的呼吸系統(tǒng)、泌尿世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)該病，李康然等于1990年在廣西分生殖系統(tǒng)和消化系統(tǒng)。雛雞感染后由于呼吸道或腎臟離了一株腎型IBV，1992年以后中國(guó)IB的流行呈上升基金項(xiàng)目：國(guó)家“十一五”科技支撐計(jì)劃專項(xiàng)（2006BAD06A08）。第一作者簡(jiǎn)介：劉金朋，男，1983年出生
