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1、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文NK細(xì)胞受體與Nectin／NecI家族配體相互作用的分子機(jī)制研究作者姓名：學(xué)科專業(yè)：導(dǎo)師姓名：完成時(shí)間：張水軍生物化學(xué)與分子生物學(xué)高福院士二。一四年五月一日UniVerSityOfSCienceandTeChnOIogyOfChinaAdiSSertatiOnfbrdOCtOr’SdegreeTheMeChaniSmofNKCe¨reCeptorSinteraCtingwiththeir¨gandSinNeCtin／NeClfam¨yAuthor’sN鋤e：ShuijunZhangSpecial時(shí)：B
2、iochemist巧andMolecularBi0109ySuperVisor：ProfGeo唱eF．GaoFinishedtime：May1吼，2014中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明。作者簽名：凇啤簽字日期：丕型竺篁：墨全中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)位論文授權(quán)使用聲明作為申請學(xué)位的條件之一，學(xué)位論文著作權(quán)擁有者授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)
3、大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即：學(xué)校有權(quán)按有關(guān)規(guī)定向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文編入《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》等有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人提交的電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后也遵守此規(guī)定。g么開口保密(——年)作者簽名：瓣一簽字日期：刁冷口b￡弓魚一導(dǎo)師簽名：，簽字日期：乞型生莖：；!摘要NK細(xì)胞在機(jī)體的免疫監(jiān)視中發(fā)揮著重要作用。它可以識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞。NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的識(shí)別和殺
4、傷依賴于它表面表達(dá)的各種激活型和抑制型的受體。這兩類NK細(xì)胞受體與靶細(xì)胞上配體結(jié)合后促進(jìn)或者抑制NK細(xì)胞的殺傷作用。除了NKG2D、NKp30、NKp44和NKp46等受體以外，NK細(xì)胞表面還表達(dá)一類特殊受體，可以識(shí)別Nectin／Necl家族蛋白。Nectin瓜ecl家族共有9個(gè)成員，分別是Nectin．1，2，3，4和Necl．1，2，3，4，5這個(gè)家族蛋白的主要功能是介導(dǎo)細(xì)胞之間的粘附。其中Nectin．2、NecI．2和NecI．5還可以作為配體被NK細(xì)胞受體識(shí)別。DNAM．1和TIGIT分別是激活型受體／抑制型受體，它們
5、識(shí)別共同的配體Nectin．2和Necl．5。CRlrAM是一種激活型的受體，它識(shí)別的配體是Necl．2。CD96的配體也是Necl．5，但其作為激活型還是抑制型的受體仍存爭議。本研究旨在闡明CR]rAM、CD96和DNAM．1與配體的相互作用機(jī)制。CRTAM與配體Necl．2的相互作用可以促進(jìn)NK細(xì)胞和T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷。除此之外，二者相互作用可以促進(jìn)CD8+T細(xì)胞分泌1，干擾素，促進(jìn)CD8+T細(xì)胞在淋巴結(jié)里的停留和活化。它們還在自身免疫病中發(fā)揮作用，在小鼠的自身免疫性脫毛癥模型中，活化的CD8+T通過CRTAM殺傷表達(dá)Ne
6、cl。2的毛囊角化細(xì)胞。但CRl隊(duì)M與Necl．2相互作用的分子機(jī)制并不清楚。此外，CRl隊(duì)M和Necl．2本身還分別參與了細(xì)胞粘附作用，這種細(xì)胞粘附作用與它們介導(dǎo)的免疫識(shí)別有什么關(guān)系也亟待研究解決。本研究中，在體外成功制備了CRlrAM／Necl．2復(fù)合體蛋白，并解析了復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)。在C觚AM／Necl．2復(fù)合體的結(jié)構(gòu)中，我們在兩個(gè)蛋白的接觸面上找到了一對(duì)“雙鎖鑰”區(qū)域負(fù)責(zé)他們之間的相互結(jié)合；我們進(jìn)一步在雙“鎖鑰”區(qū)域引入突變，通過表面等離子共振實(shí)驗(yàn)和四聚體染色實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了區(qū)域上關(guān)鍵氨基酸對(duì)于復(fù)合物形成的重要作用。同時(shí)，我們通
7、過體外生化實(shí)驗(yàn)證實(shí)C砌rAM和Necl．2本身都可以形成同源二聚體，有意思的是，它們形成同源二聚體的結(jié)合面與它們形成異源二聚體的結(jié)合面相同。這就揭示了同源二聚化和異源二聚化的競爭關(guān)系。我們通過體外的細(xì)胞接合實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了上面的競爭模式。由于C觚AM和Necl．2的同源二聚化介導(dǎo)了細(xì)胞粘附，而它們互相二聚化介導(dǎo)了免疫識(shí)別，這也體現(xiàn)了細(xì)胞粘附和免疫識(shí)別相互競爭的關(guān)系。通過我們的結(jié)構(gòu)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)的這種免疫分子結(jié)合的競爭關(guān)系在生理上可能具有重要意義，例如Necl．2同源二聚化介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的粘附和聚集會(huì)促進(jìn)它們向血管內(nèi)皮細(xì)胞的侵入和摘要轉(zhuǎn)
8、移，而CR]rAM與Necl．2的識(shí)別一方面會(huì)促進(jìn)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷，另一方面會(huì)抑制腫瘤細(xì)胞自身的粘附、聚集和向組織的轉(zhuǎn)移。DNAM．1作為NK細(xì)胞另一個(gè)重要的表面受體在NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷巾發(fā)揮重要作用。如DNAM．1與配體Nectin
