資源描述：
《kshv編碼vgpcr對斑馬魚胚胎早期發(fā)育的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號——學(xué)校代碼!Q5壘2密級KSHV編碼vGPCR對斑馬魚胚胎早期發(fā)育的影響TheeffectofKSHVencodedvGPCRonearlyembryonicdevelopmentinzebrafish研究生姓名直垡指導(dǎo)教師姓名、職稱馮造熬撞湖南師范大學(xué)學(xué)位評定委員會辦公室二零一四年五月摘要卡波氏肉瘤(KS)是艾滋病患者常見的高致死性血管增生型腫瘤。卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHv)是KS的直接病因，該病毒基因組編碼的G一蛋白偶聯(lián)受體(vGPCR)是已知的幾個KSHV致瘤蛋白之一，此蛋白與KSHV相關(guān)惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。vGP
2、CR在細(xì)胞中的表達(dá)能夠激活多條信號通路和影響諸多轉(zhuǎn)錄因子從而增加促炎癥細(xì)胞因子和血管生成細(xì)胞因子的生成。vGPCR在裸鼠中表達(dá)能夠引起裸鼠產(chǎn)生腫瘤，轉(zhuǎn)vGPCR基因小鼠也能形成類似人類KS的病變。斑馬魚是一種重要的模式生物，在胚胎發(fā)育機(jī)制的研究及各種人類疾病研究中得到了廣泛的應(yīng)用。斑馬魚作為人類病毒研究的模式生物罕見報道，目前尚未有采用斑馬魚來研究KHSV的研究報道。本研究首次采用斑馬魚來對KHSV中致癌基因vGPCR進(jìn)行研究，鑒定vGPCR對斑馬魚早期胚胎發(fā)育的影響。本研究采用顯微注射法將vGPCR基因?qū)氚唏R魚受精卵；利用形態(tài)學(xué)觀察、
3、mRNA水平表達(dá)檢測、血管生成定量分析和血管染色法分析vGPCR對斑馬魚早期胚胎發(fā)育的影響。本論文研究內(nèi)容和研究結(jié)果如下：1．以FRT／TO．cDNA5載體和CDH．CMV-MCS．EF1．copGFP載體為基礎(chǔ)構(gòu)建了表達(dá)vGPCR的重組質(zhì)粒CDH--CMV-HA--vGPCR-EF1--copGFP；2．通過磷酸鈣轉(zhuǎn)染法將CDH．CMV-HA．vGPCR．EF1．copGFP轉(zhuǎn)入HEK293T細(xì)胞，并進(jìn)行免疫印跡雜交檢測，結(jié)果顯示該重組質(zhì)粒能夠在細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)目的蛋白；3．采用顯微注射技術(shù)將CDH-CMV-HA．vGPCR．EFl．co
4、pGFP導(dǎo)入斑馬魚受精卵，統(tǒng)計結(jié)果表明注射vGPCR的實驗組胚胎存活率為50．80％，GFP表達(dá)率為53．58％；注射空載體的對照組胚胎存活率為55．02％，GFP表達(dá)率為48．16％。形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果顯示，注射vGPCR的胚胎與對照組的發(fā)育進(jìn)程基本一致，vGPCR對斑馬魚胚胎早期形態(tài)發(fā)育未產(chǎn)生明顯影響；對注射了vGPCR并表達(dá)GFP的胚胎進(jìn)行RT-PCR檢測，結(jié)果顯示vGPCR在斑馬魚胚胎中存在較低水平的mRNA表達(dá)；4．利用堿性磷酸酶定量檢測法對vGPCR注射組斑馬魚胚胎和對照組胚胎分別進(jìn)行分析，結(jié)果表明兩組胚胎的堿性磷酸酶含量相差不大
5、，表明vGPCR對斑馬魚早期胚胎血管生成總量無明顯影響；5．對注射vGPCR后72小時的胚胎血管進(jìn)行堿性磷酸酶染色，觀察到斑馬魚胚胎新生血管發(fā)育受到了不同程度的影響，主要為腸下靜脈扭曲與血管排布紊亂，說明vGPCR能夠造成斑馬魚胚胎早期血管發(fā)育畸形。綜上所述，本研究證明了vGPCR基因能夠在斑馬魚胚胎中表達(dá)，外源vGPCR的導(dǎo)入對斑馬魚早期胚胎的形態(tài)學(xué)發(fā)育并未造成明顯影響，但會導(dǎo)致斑馬魚早期胚胎新生血管發(fā)育畸形。本研究表明斑馬魚能夠成為研究vGPCR及KSHV的生物模型，為今后研究vGPCR以及其他KSHV基因的致病機(jī)制開拓了新的領(lǐng)域。關(guān)
6、鍵詞：vGPCR，斑馬魚，血管生成ABSTRACTKaposi’Ssarcoma(KS)isanangioproliferativeneoplasmofhi曲lethalitywhichiscommoninAIDSpatients．TheKaposi’Ssarcoma-associatedherpesvirus(Ksi-rv)isthedirectetiologyforKS．G-proteincoupledreceptor(vGPCR)encodedbythevirusisakindofoncogenicproteinwhichisbou
7、ndupwiththeappearanceofKSHV-associatedmalignancies．ManyresultshaveprovedthatexpressionofvGPCRincellsCanactivatedifferentsignalingpathwaysandinfluencemanytrancriptionfactors，therebyincreasetheproductionofproinflammatoryc”okinesandangiogenesiscytokines．TheexpressionofvGPCRi
8、nnudemicecanledtotumorigenesisandinvGPCRtransgenicmiceitcarlalsodevelopthehuman—likeKSdisease．Ze
