葉酸-殼聚糖納米載體的制備及其靶向作用研究

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1、萬方數(shù)據(jù)學校代碼：10225學號：B14060學位’論文葉酸一殼聚糖納米載體的制備及其靶向作用研究指導教師姓名：申請學位級別：論文提交日期：授予學位單位：邢志華方桂珍博士學科專業(yè)：林產(chǎn)化學加工工程2014—03-20論文答辯日期：2014-06—10東北林業(yè)大學授予學位日期：2014—06答辯委員會主席：論文評閱人：聾多厶符素大學萬方數(shù)據(jù)UniversityCode：10225Re西sterCode：B14060DissertationfortheDegreeofDoctorPreparationofFolate--

2、chitosanNanoparticlesandItsTargetingCharacterizationAsDrugCarriersCandidate：Supervisor：ZhihuaXingGuizhenFangAcademicDegreeAppliedfor：DoctorSpeciality：DateofOralExamination：University：ChemicalProcessingEngineeringofForestProducts2014．06．10NortheastForestry萬方數(shù)據(jù)摘要

3、殼聚糖(CTS)是一類重要的尚未高效利用的天然高分子。本文依據(jù)靜電相互作用的原理，以殼聚糖和葉酸為原料，采用離子交聯(lián)法制備了葉酸．殼聚糖納米粒及載藥納米粒。利用紅外光譜(IR)、激光粒度分析儀、透射電子顯微鏡(TEM)和zeta電勢表征了納米粒的化學結構、平均粒徑、分散指數(shù)和外貌形態(tài)特征。測定了藥物的包封率、載藥率、體外釋放速率、穩(wěn)定性、體內(nèi)外抑瘤活性、器官靶向性、平均滯留時間。本研究不僅改善了葉酸．殼聚糖納米粒的制備方法，而且使其載藥范圍擴大，所得載藥納米粒既具備載藥率高、包封率高、穩(wěn)定性好的特點，又具有靶向緩釋的

4、顯著特性，為殼聚糖資源的合理利用提供基礎數(shù)據(jù)和技術支持。具體研究內(nèi)容及結果如下：以殼聚糖為載體、葉酸(FA)為靶向配體、三聚磷酸鈉(TPP)為聚陰離子，在水相中，利用陰陽離子間的靜電相互作用，采用離子交聯(lián)法一步合成了空白(不載藥)葉酸．殼聚糖納米粒(CTS．TPP．FA)。紅外光譜(IR)證實葉酸與殼聚糖是以離子鍵結合的。以納米粒粒徑(小于200nm)為指標，考察了對納米粒粒徑的影響因素，得到最佳制備工藝為：在水浴55℃、滴加速度ld／s、攪拌速度900～1000r／min條件下，以VmL濃度為2．0mg／mL的殼聚

5、糖醋酸溶液(醋酸濃度為1％，此時pH值為3．95)為底液，先向其滴加V／4mL濃度為1．0mg／mL的葉酸氨水溶液，然后向其滴加V／10mL濃度為2．0mg／mL的三聚磷酸鈉溶液，滴加完畢，繼續(xù)攪拌10分鐘，得空白葉酸．殼聚糖納米粒水分散體系，離心，凍干，得空白葉酸．殼聚糖納米粒。在最佳制備工藝條件下，所得納米粒為球形，大小均勻，水合平均粒徑為145nm，分散指數(shù)為1．019。在空白納米粒制備基礎上，以包封率為指標，綜合考慮載藥率及粒徑大小，考察了藥物的加入方式及加入量對包封率及載藥率的影響，結果表明：對于羥基喜樹堿

6、(HCPT)，先使HCPT與殼聚糖醋酸溶液以3：10(羥基喜樹堿：殼聚糖，w／w)比例混合。對于阿霉素(DOX)，先使DOX與TPP生成聚電解質(zhì)，然后按空白納米粒的制備方法制得載藥納米粒(HCPT／CTS．TPP．FA和DOX／CTS．TPP．FA)。所得HCPT／CTS．TPP．FA納米粒平均粒徑為150nm，包封率、載藥率分別為89．90％、19．80％，體外累積釋藥率24h可達87％，其釋放規(guī)律符合Higuchi方程，納米粒表面帶正電荷，電位值為+50．1mV，粒度穩(wěn)定性較好，放置數(shù)十天粒徑幾乎無變化。所得DO

7、X／CTS．TPP．FA納米粒平均粒徑為162nm，包封率、載藥率分別為91．00％、21．50％，體外累積釋藥率5d可達28．25％，其釋放規(guī)律符合Higuchi方程。納米粒表面帶正電荷，電位值為+52．1mV，粒度穩(wěn)定性好，放置數(shù)十天粒徑幾乎無變化。從粒徑大小及所連接葉酸的量推斷，以上兩種納米粒子具有很好的腫瘤靶向性。體外細胞實驗考察了載羥基喜樹堿納米粒對人肝癌細胞HepG．2、人肺癌細胞A549及人乳腺癌細胞MCF．7的生長抑制作用。經(jīng)MTT法檢測，結果表明：HCPT／CTS．TPP．萬方數(shù)據(jù)摘要FA對肝癌、肺

8、癌、乳腺癌細胞的生長均具有明顯的抑制作用，其抑制率隨藥物濃度、作用時間的增加而升高，具有時間和劑量依賴性。HCPT／CTS．TPP．FA的抗腫瘤作用優(yōu)于HCPT／CTS．TPP，與對照組相比差異顯著(P<0．01)，證實HCPT／CTS．TPP．FA具有良好的腫瘤靶向作用。體內(nèi)動物實驗考察了納米粒對荷S180肉瘤小鼠的抑瘤率的影響，結果表明：含