葉酸靶向癌細(xì)胞納米熒光探針的制備及其性能研究.pdf

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1、犬－＇ｉｌ嫂大愛(ài)ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ碩士芽位記文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ葉酸ｆｉ向癌細(xì)胞納米焚光探針的制備及其性能研究生物化工學(xué)科專業(yè)博作者姓名韓指忌救肺賈凌云教授２０１５年６月答辯日期—＿碩士學(xué)位論文葉酸勒向癌細(xì)胞納米焚光探針的制備及其性能研究ａｒａｏｎｎｄ－ＰｒｅｔｉａＰｒｏｅｒｔｉｅｓｏｆＦｏｌａｔｅｔａｒｅｔｅｄＣａｎｃｅｒｐｐｇＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＮａｎｏｐｒｏｂｅ作者姓名：韓博學(xué)科、專業(yè)：生物化工學(xué)號(hào)：２

2、１２１８１２６指導(dǎo)教師：賈凌云教授完成日期：２０１５年４月大理工大旁ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ大連理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中巳經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地方外，本論文不包含其他個(gè)人或集體巳經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含其他已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過(guò)的成果一。與我同工作的同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均巳在論文中做了明確的說(shuō)明并表示了謝意。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。學(xué)位論文題目：葉酸觀向癌細(xì)胞納米熒光探針的制備

3、及其性能研究＇作者簽名：日期：年么月日＿ｔｋ—大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要￣粒徑在１００２００ｎｍ的納米粒子具有良好的增強(qiáng)性滲透及滯留（ＥｎｈａｎｃｅｄｅｒｍｅａｔｉｏｎｐａｎｄｒｅｔｅｎｔｉｏｎｅｆｅｃｔＥＰＲ、，）效應(yīng)，有望解決目前癌癥檢測(cè)準(zhǔn)確率低邊緣不清的問(wèn)題，己成為癌癥勒向檢測(cè)定位和治療的研究熱點(diǎn)。研宄表明，具有良好水溶性和相容性的右旋一￣２００ｎｍ的納米粒子糖酐可以通過(guò)自組裝的方法，但在此基礎(chǔ)上進(jìn)，獲得粒徑在１００步添加葉酸（Ｆｏｌｉｃａｃｉｄ，ＦＡ）作為ＩＥ向分子，通過(guò)主動(dòng)ＩＥ向與被動(dòng)ＩＥ向結(jié)合以提高粒子ＩＥ向作用從而

4、實(shí)現(xiàn)癌癥檢測(cè)定位的研宄非常少。本論文通過(guò)自組裝的方式，制備以葉酸￣－１ＤＣＡ－ＦＩＦＡ為紀(jì)向分子００２００ｎｍ的右旋糖酐粒子（Ｄｅｘ／ＮＰｓ），、焚光標(biāo)記的粒徑為使其作為納米癌細(xì)胞探針以實(shí)現(xiàn)主動(dòng)ＩＥ向與被動(dòng)ＩＥ向的結(jié)合檢測(cè)并對(duì)其性能進(jìn)行研宄。研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面：１．利用疏水的脫氧膽酸（Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ，ＤＣＡ）對(duì)右旋糖酐進(jìn)行修飾，利用自組裝的方法，并通過(guò)對(duì)初始濃度及去離子水滴加速度的優(yōu)化，制得直徑峰值１６７．５ｎｍ且分布均一的脫氧膽酸修飾的右旋糖酐納米粒子。但粒子的穩(wěn)定性并不理想，需進(jìn)行改進(jìn)。？２－．在ＤｅｘＤＣＡ的基礎(chǔ)上增加氨基，

5、通過(guò)自組裝的方法，制得多種粒徑在１００２００－－ＮＰｓｎｍ的氨基化脫氧膽酸修飾右旋糖肝納米粒子（ＤｅｘＤＣＡＮＨ２）。由于氨基的靜電排斥作用ｅｘ－－ｓ，ＤＤＣＡＮＨ２ＮＰ在溶液中的穩(wěn)定性大幅提高，可以存放１５天以上且在細(xì)？胞培養(yǎng)液中４ｈ內(nèi)粒徑仍在１００２００ｎｍ。－ｅｘ－ｏｒｅｓｃｅ３．在ＤＤＣＡＮＨ２的基礎(chǔ)上修飾異硫氰酸熒光素（Ｆｌｕｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ，ＦＩＴＣ）作為熒光標(biāo)記物、葉酸作為朝向分子，通過(guò)自組裝的方法，制得三種具有焚光且粒徑在－（－－１００２００ｎｍ的葉酸紀(jì)向ＦＩＴＣ標(biāo)記的脫氧膽酸修飾右旋糖酐納米粒子ＤｅｘＤＣＡＦＩ／ＦＡ

6、ＮＰｓ），三種納米粒子在溶液中的穩(wěn)定性良好，可以存放１４天以上，在細(xì)胞培養(yǎng)液中４ｈ內(nèi)粒徑仍２００ｎｍ左右。２。－－－４ＤＣＡ－ＦＩ．ＤｅｘＦＩ０ＦＡＮＰｓ（上標(biāo)表示ＤｅｘＤＣＡＩＴＣ和氨基的投料比．５／０．５合成時(shí)Ｆ，－－－下標(biāo)分別表示ＤｅｘＤＣＡ－ＦＩＴＣ和ＤｅｘＤＣＡＦＡ的含量）對(duì)葉酸受體（ＦＲ）過(guò)量表達(dá)的一５－－ＦＲ（＋）組和ＦＲ表達(dá)量較少的ＦＲ（）組癌細(xì)胞具有ｅｘＤＣＡ－ＦＩ定的區(qū)分能力．ＦＡ；Ｄ％７５／ＦＲ＋ＦＲ（－癌細(xì)胞具有明顯的區(qū)分能力０．２５ＮＰＳ對(duì)（）組和）組，滿足檢測(cè)要求。且兩種－納米粒子在濃度較低時(shí)對(duì)ＭＣＦ７細(xì)胞、Ｈｅｌａ細(xì)胞、

7、Ａ５４９細(xì)胞的細(xì)胞毒性都很小，并都一具有良好的血液相容性，有望進(jìn)步進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)或通過(guò)改變標(biāo)記物或祀向分子進(jìn)行性能的改良。關(guān)鍵詞：癌細(xì)胞乾向檢測(cè)；納米粒子；葉酸；熒光－－Ｉ葉酸勒向癌細(xì)胞焚光探針的制備及其性能研究ｒｅｒｔｏｎｒｏｅｒｅｓａｅ－ｔａｒｅｔｅｄａｎｃｅｒＰｐａａｉａｎｄＰｐｔｉｏｆＦｏｌｔｇＣＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＰｒｏｂｅＡｂｓｔｒａｃｔ－Ｎａｎｏｐａｒ