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1、培養(yǎng)基名稱:營(yíng)養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基) 品種編號(hào):022020 培養(yǎng)基英譯名稱:NutrientAgar 培養(yǎng)基規(guī)格:250g 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(用途:用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定、保存菌種及純培養(yǎng),也可用于消毒效果測(cè)定?! I(yíng)養(yǎng)瓊脂使用原理: 蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;氯化鈉能維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑?! ∨浞?每升): 蛋白胨10g 牛肉膏粉3g 氯化鈉5g 瓊脂15g 最終pH7.3±0.2 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(使用方法: 1、稱取營(yíng)養(yǎng)瓊脂(33g,加入蒸餾水或去離子水1L,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝三角瓶,12
2、1℃高壓滅菌15min,備用。 2、(食品)以無菌操作稱取檢樣25克(或25mL),放入含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的玻璃三角瓶中(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠),充分振搖,即為1:10的均勻稀釋液。依次做1:100,1:1000……稀釋液?! ?、根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì),選擇2—3個(gè)合適的稀釋度,分別在做10倍稀釋的同時(shí),吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中,每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿?! ?、稀釋液移入平皿后應(yīng)及時(shí)將涼至46℃左右的培養(yǎng)基注入平皿約15mL,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻,同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。待瓊脂凝固后
3、,倒置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h。 5、觀察結(jié)果?! ?、菌落計(jì)數(shù)方法: 做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí),可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏,在計(jì)下各平板的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)?! ?、菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告: 選取菌落數(shù)在30—300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板,應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù),其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù),若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有我鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)(菌落之
4、間無明顯界線),若僅有一條鏈,可視為一個(gè)菌落;如有不同來源的幾條鏈,則應(yīng)將每條鏈視為一個(gè)菌落計(jì) A:稀釋度的選擇: 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30—300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之?! ∪粲袃蓚€(gè)稀釋度.其生長(zhǎng)的菌落數(shù)無均在30—300之間,則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2,則應(yīng)報(bào)告其平均數(shù);若大于2則報(bào)告其較小的數(shù)字?! ∪羲邢♂尪鹊钠骄鋽?shù)均大于300則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之?! ∪羲邢♂尪鹊钠骄鋽?shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋度最底的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之?! ∪羲邢♂尪染鶡o菌落生長(zhǎng),則以小于1乘以最底稀
5、釋倍數(shù)報(bào)告之。 若有稀釋度的平均菌菌落數(shù)均不在30—300之間,其中一部分大于300或小于30時(shí),則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。 菌落數(shù)的報(bào)告: 菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí),按其實(shí)有數(shù)報(bào)告,大于100時(shí),采用二位有效數(shù)字,在二位數(shù)字后面的有效數(shù)值,以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù),也可以用10的指數(shù)來表示?! ∠♂尪冗x擇及菌落數(shù)報(bào)告方式 例次稀釋液及菌落數(shù)兩稀釋液之比菌落總數(shù)個(gè)/g或mL報(bào)告方式個(gè)/g或mL 10-110-210-3 1多不可計(jì)16420——1640016000或1.6×104 2多不可計(jì)29546
6、1.63775038000或3.8×104 3多不可計(jì)271602.2——2710027000或2.7×104 4多不可計(jì)多不可計(jì)313——31300310000或3.1×105 527115——270270或2.7×102 6000——<1×10<10 7多不可計(jì)30512——3050031000或3.1×104 質(zhì)量控制: 本品接種下列菌株,置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h,結(jié)果如下: 菌名 菌號(hào) 生長(zhǎng)狀況 菌落特征 大腸埃希氏菌 ATCC25922 良好 白色—灰白色,圓形,邊緣整齊,表面光滑,
7、濕潤(rùn)?! 〗瘘S色葡萄球菌 ATCC6538 良好 黃色,圓形,邊緣整齊,表面光滑、濕潤(rùn),不透明?! I(yíng)養(yǎng)瓊脂貯存方法:貯存于避光、陰涼干燥處,用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。