小鼠胚胎著床前期longsage文庫構(gòu)建、驗(yàn)證及相關(guān)基因研究

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1、重慶醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所量交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研，究殘果。據(jù)我所知，涂了文孛特別如漢標(biāo)注和致謝的地方努，論文孛不包含其他人已綴發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)戇學(xué)位或證書藹使用過的材料，與戲黧王作的蔑志對(duì)本研究所做妁任何賈獻(xiàn)均巴在論文中作了明確的說蛾并表示謝意。孛請(qǐng)學(xué)位論文與資料著有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)經(jīng)。學(xué)位論文作者簽名—燮：日期：竺蘭：邂學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解重慶醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位豢闋論文王佟戇每識(shí)產(chǎn)叔單位屬熏

2、麥醫(yī)科大學(xué)。本人鬻證畢韭離校髫，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為重慶醫(yī)科大學(xué)．學(xué)校有權(quán)保留并向圜家有關(guān)部弱或枧攜送交論文的復(fù)竄繹和磁盤，競(jìng)許論文被查溪和償蔫。學(xué)棱哥漢公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)輯(保密內(nèi)容除外)，可以采用影印、縮印或其他手段保毒論文。論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：疆期：重慶疆斟大學(xué)硬士磷究生學(xué)位論文小鼠胚胎著床前期LongSAGE基因表達(dá)文庫構(gòu)建、驗(yàn)證及相關(guān)基因研究．▲上?！狫“刖罱遺傳基因作為各種生物最基本的“建設(shè)藍(lán)鷺黟，決定著每個(gè)生物個(gè)體凡乎所有的生物學(xué)變化。研究清楚每一個(gè)基因的作用機(jī)制，對(duì)解釋生命起源、保護(hù)瀕危物種、控制人類

3、疾病、延長人類壽命等諸多方面都具有重大意義。隨著研究技術(shù)手段的進(jìn)步，人們已經(jīng)不滿足于把某一個(gè)特定分子與基因作為突破口去探尋某個(gè)生物學(xué)變化的發(fā)生機(jī)制，麗是使用大規(guī)模的基因表達(dá)譜同時(shí)研究多個(gè)基因，甚至是基因組。其中寡核營酸蕊片、DNA微陣列以及基因表達(dá)系列分析(SerialAnalysisofGeneExpression，SAGE)是目前應(yīng)用最廣泛的基因表達(dá)分析方法。SAGE技術(shù)相對(duì)于寡核營酸芯片、DNA微陣列更具優(yōu)勢(shì)：能較完整地獲得基因組表達(dá)豐度的數(shù)量信息，大規(guī)模對(duì)轉(zhuǎn)錄本迸行定性和定量分析，可充分了解基因轉(zhuǎn)錄組的全貌，不僅熊檢測(cè)已知基透，甚至還可以發(fā)現(xiàn)

4、新基因，被涯明是一種對(duì)全基因組基因進(jìn)行表達(dá)分析和尋找差異表達(dá)基因的強(qiáng)有力工具。通過對(duì)轉(zhuǎn)錄本特定位置的短寡核營酸標(biāo)簽(即SAGE}摹簽)的鑒定、分j!蓐可以獲取基因表達(dá)豹信息。每種標(biāo)簽在全部標(biāo)簽中所占的比例可以反映它所代表的轉(zhuǎn)錄本在整個(gè)轉(zhuǎn)錄體系中的表達(dá)豐度。因此，SAGE技術(shù)可以黑來準(zhǔn)確她對(duì)特定組織的基因表達(dá)進(jìn)行定性稠定量分析。SAGE的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可以在懿體水平對(duì)細(xì)胞或組織中的大量轉(zhuǎn)錄本同時(shí)進(jìn)行定量分析，秀無論其是委為已知基因。囂焉，可以客涎、全西地反映基因轉(zhuǎn)錄組豹全貌。因此，我們采用SAGE技術(shù)構(gòu)建小馘胚胎著床前期子宮內(nèi)膜LongSAGE基囂文瘴，并

5、與我囂】已經(jīng)構(gòu)建的著床甥子富內(nèi)膜LongSAGE基因文癢(我稍之翦完成的另～部分工作)進(jìn)行定性和定量分析，獲取二脊的差異表達(dá)基因，將有助于更深入地理解和認(rèn)識(shí)題艙藿痣酶分子瓿理，麓時(shí)對(duì)艇床不孕瘥觴診治以及探尋掰的生殖調(diào)控手段也具有重要的實(shí)踐價(jià)值。8重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文第一章小鼠胚胎著床前期(d3)子宮內(nèi)膜LongSAGE基因表達(dá)文庫的構(gòu)建基因表達(dá)系列分析技術(shù)(serialanalysisofgeneexpression，SAGE)是1995年蠢美國Joh／lsHopkins大學(xué)瓣瘤中心VetculescuVE等11l建立斡一辯薪的基因表達(dá)模式

6、研究技術(shù)，它可以在整體水平對(duì)細(xì)胞或組織中的大量轉(zhuǎn)錄本同時(shí)進(jìn)行定性和定量分析，而無論蒸是否為西知基藪。該技術(shù)主要基于蕊個(gè)原理：首先，在一個(gè)轉(zhuǎn)錄體系中，每種轉(zhuǎn)錄本都可以用唯一一個(gè)特異的固定長度寡核營酸序列(9-14bp)來代表，這些短牟羅}j稱為SAGE標(biāo)簽(SAGEtag)。扶人類基因縫計(jì)劃酶結(jié)果來看，人類基因組編碼的基因數(shù)目在28642"-"153478種之間，特定組織或細(xì)胞表達(dá)的基因數(shù)量則不超過15000種。以—-叁9bp的標(biāo)簽庫為例，理論上爵以區(qū)分礦(262144)種轉(zhuǎn)蒙本，已足夠代表任何一種特定的組織或細(xì)胞的全部轉(zhuǎn)錄本。其次，SAGE標(biāo)簽經(jīng)隨機(jī)

7、連接、擴(kuò)增并集中在一個(gè)克隆中測(cè)痔，并將得到酶短序列核營酸順序以連續(xù)的數(shù)據(jù)形式進(jìn)行處理，就能對(duì)數(shù)以千計(jì)的mRNA轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行分析，每種標(biāo)簽猩全部標(biāo)簽中所占的比側(cè)可以反映它所代表的轉(zhuǎn)錄本在整個(gè)轉(zhuǎn)錄體系中的表達(dá)車度。因此，SAGE能夠直接分析任何～種類型細(xì)胞或組織的基因表達(dá)信息，并對(duì)細(xì)胞或組織的表達(dá)基因進(jìn)行定性與定量分析。由于初始建立的SAGE方案獲褥的是14如的撼簽，標(biāo)簽齙特異性較低，多重匹配標(biāo)簽較多，不便于進(jìn)行后期的生物信息學(xué)分析，所以該腫瘤中心-1=2002年應(yīng)用一種新發(fā)現(xiàn)的核酸內(nèi)切酶Minel作為標(biāo)簽酶，使之獲得的標(biāo)簽長度達(dá)到2lbp，大大提高了標(biāo)簽

8、的特異性，這季申改進(jìn)后的SAGE稱為LongSAGE。由予小鼠受孕率高，繁殖周期短，并且翻人類的辨發(fā)生、茲著