高效液相色譜分析ppt培訓(xùn)課件

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1、第三章液相色譜法簡介3.1高效液相色譜分析法的特點(diǎn)1.高壓采用高壓泵使流動液能迅速通過色譜柱，一般達(dá)150×105～350×105Pa。2.高速高壓帶來高速，分析時(shí)間一般少于lh。3.高效柱效能約可達(dá)3萬塔板/米（GC的柱效約為2000/米）。4.高靈敏度由于采用了高靈敏度的檢測器，最小檢測量可達(dá)10-9g，甚至10-11g。5.可用于高沸點(diǎn)的、不能氣化的、熱不穩(wěn)定的以及具有生理活性物質(zhì)的分析一、高效液相色譜法二、HPLC與GC差別1．分析對象的區(qū)別GC：適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品；但對高沸點(diǎn)、揮發(fā)

2、性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品，尤其對大多數(shù)生化樣品不可檢測。(占有機(jī)物的20%)HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品（包括有機(jī)介質(zhì)溶液），不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測用途廣泛。（占有機(jī)物的80%）2．流動相的區(qū)別GC：流動相為惰性，氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相有相互作用。HPLC：流動相為液體，流動相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對分離起正向作用。且流動相種類較多，選擇余地廣，改變流動相極性和pH值

3、也對分離起到調(diào)控作用，當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相也可以增大分離選擇性。3．操作條件差別GC：加溫操作HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬小）三、HPLC的應(yīng)用applicationofHPLC1.環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析固定相：薄殼型硅膠(37～50?m)流動相：正己烷流速：1.5mL/min色譜柱：50cm?2.5mm(內(nèi)徑)檢測器：差示折光檢測器可對水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行分析。2.稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴多為致癌物質(zhì)。固定相：十八烷基硅烷化鍵合相流動相：20%甲醇-水～100%甲醇

4、線性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱溫：50oC柱壓：70?104Pa檢測器：紫外檢測器第二節(jié)影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素影響分離的主要因素有流動相的流量、性質(zhì)和極性。在高效液相色譜中,速率方程中的分子擴(kuò)散項(xiàng)B/U較小，可以忽略不計(jì)，而只有兩項(xiàng)，即：H=A+Cu故液相色譜H-u曲線與氣相色譜的形狀不同，如圖所示：（1）流速：流速大于0.5cm/s時(shí),H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。(2)液體的粘度比氣體大一

5、百倍,密度為氣體的一千倍,故降低傳質(zhì)阻力是LC中提高柱效的主要途徑。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。液相色譜中，不可能通過增加柱溫來改善傳質(zhì)。恒溫改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。1．分離原理：利用組分分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力的差異分離前提：K不等或k不等一、液固吸附色譜法（LSC）流動相為液體，固定相為固體吸附劑第三節(jié)HPLC分離類型與原理2．固定相<>分為極性和非極性兩類<>極性固定相：硅膠、氧化鋁和氧化鎂、硅酸鎂分子篩等，其中極性硅膠應(yīng)用最普遍。<>非極性固定相：多孔微粒活性碳、

6、多孔石墨化炭黑，以及高分子多孔微球等。1）硅膠：<>無定型硅膠最早使用，傳質(zhì)慢、柱效低<>薄殼型硅膠直徑為30~40μm的玻璃珠表面涂布一層1~2μm厚的硅膠微粒，孔徑均一、滲透性好、傳質(zhì)快，但柱容量有限。<>全多孔球型硅膠粒度一般為5~10μm，顆粒和孔徑的均一性都比前兩種好，柱容量大，為當(dāng)今液固色譜固定相的主體，也是鍵合固定相的主要基質(zhì)。原理-吸附特點(diǎn)-峰易拖尾適用-分離極性化合物2）高分子多孔小球：特點(diǎn)：柱選擇性好，峰形好，柱效低適用：分離弱極性化合物3．流動相除了最基本的要求之外，主要考慮溶劑強(qiáng)度，溶解度

7、參數(shù)及極性參數(shù)等。1．分離原理：利用組分在兩相中溶解度的差異2．固定相：載體+固定液（物理或機(jī)械涂漬法）缺點(diǎn)是固定液層的耐溶劑沖刷性能差，固定液易流失，從而導(dǎo)致柱效降低，被鍵合相填料所取代。3．正相色譜-固定液極性>流動相極性（NLLC）極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱，適于分離極性組分。反相色譜-固定液極性<流動相極性（RLLC）極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱適于分離非極性組分。二、液液分配色譜法（LLC）鍵合相色譜基本上屬于分配色譜，與液液分配色譜固定相不同的是“固定液”以化學(xué)鍵的形式與載體結(jié)合

8、在一起的。常規(guī)化學(xué)鍵合相利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面1．分離機(jī)制：分配+吸附（以LLC為基礎(chǔ)）2．特點(diǎn)：不易流失熱穩(wěn)定性好化學(xué)性能好載樣量大適于梯度洗脫4.化學(xué)鍵合相色譜（CPC）三、離子色譜法（IC）1.離子交換色譜凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)，通常都可以用離子交換色譜法進(jìn)行分離，其主要根據(jù)固定相對待測離子對的親和力的差異來實(shí)現(xiàn)分離。固定相類型：強(qiáng)陽離子交換劑