《高效液相色譜分析》ppt課件

《《高效液相色譜分析》ppt課件》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、第9章高效液相色譜分析Highperformanceliquidchromatography(HPLC)第一節(jié)概述GC只適合分析較易揮發(fā)、且化學性質(zhì)穩(wěn)定的有機化合物，而HPLC則適合于分析那些用GC難以分析的物質(zhì)。HPLC的應用范圍遠遠超過GC。高效液相色譜法是繼氣相色譜之后，20世紀70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術。1.高效液相色譜法定義指一種用液體為流動相的色譜分離分析方法。它在經(jīng)典色譜理論的基礎上，采用了高壓泵、化學鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測器等新實驗技術建立的一種液相色譜分析法。

2、高壓：150-350×105Pa高效：大于3萬塔板/米（GC：103塔板/米）高靈敏：10-9g（紫外檢測）、10-11g（熒光檢測）2.高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法的比較經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜法粒徑(μm)75-6003-50（常用5-10）柱前壓力(atm)0.01-1.020-300分析時間(h)1-200.05-1.0色譜柱長度(cm)50-2002-30柱效(塊/m)2-50104-105樣品用量(g)1-1010-6-10-2經(jīng)典液相色譜法，流動相在常壓下輸送，分析周期長。高效液相色譜法流動相改為高

3、壓輸送（最高輸送壓力可達3.5?107Pa）色譜柱是用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜；柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測。因此，高效液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點。所以稱它為高壓、高速、高效液相色譜法。3.HPLC在藥物分析中的作用藥品質(zhì)量標準在藥物分析中，HPLC已成為對各類藥物及其制劑進行鑒別、檢查、雜質(zhì)分離及含量測定的重要手段，以下以中國藥典和美國藥典為代表說明HPLC在藥品質(zhì)量標準中的作用。中國藥典含量主要測定方法統(tǒng)計/%版本滴定分析法質(zhì)量分析法分光光度法

4、HPLCGC1953年版68.811.90001963年版68.211.36.93001977年版61.83.8922.3001985年版57.82.6428.01.170.291990年版52.12.2926.36.090.441995年版51.81.4228.98.010.572000年版47.61.228.017.80.6美國藥典含量測定方法比較（品種數(shù)）版本HPLCGCTLCUVIRFLAASNMRTI20版62682546921107221版363142698131727222版87115715542171

5、776578423版1188100449015578280324版138611113741414962775AtomicAbsorptionSpectroscopy原子吸收光譜NuclearMagneticResonance核磁共振Infraredray紅外光譜Fluorescencespectrum熒光光譜TI滴定分析法藥物分析研究方法以我國分析試驗室雜志中的藥物分析綜述統(tǒng)計分析見表1992~2000年分析試驗室雜志藥物分析論文統(tǒng)計/%方法19921994199619982000UV27.727.128.517.6

6、16.2HPLC27.029.239.244.540.0GC12.810.37.69.78.0TLC13.416.612.216.121.4HPCE3.25.6電化學8.54.72.5其他10.611.410.09.08.8論文總數(shù)553923760870879HPCE高效毛細管電泳法3.高效液相色譜法與其他分離方法的比較項目分餾結(jié)晶提取經(jīng)典柱色譜TLCGCHPLC分離效率低低低低高高高分離速度慢慢慢慢較快快快應用范圍窄窄廣廣廣較窄廣樣品用量多多多多少少少可否用于制備可可可可尚可可可可否用于痕量分析否否否否可可可分析

7、鑒定可可否否可可可分析靈敏度低低--高高高4.應用非揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定組分的分析，在工業(yè)、科學研究，尤其是在生物學和醫(yī)學等方面應用極為廣泛。如氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、烴、碳水化合物、藥品、多糖、高聚物、農(nóng)藥、抗生素、膽固醇、金屬有機物等分析。1.化學鍵合固定相:目前應用最廣、性能最佳的固定相a.硅氧碳鍵型：≡Si—O—Cb.硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—C穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機溶劑，應用最廣；c.硅碳鍵型：≡Si—Cd.硅氮鍵型：≡Si—N第三節(jié)HPLC的固定相和流動相一.固定相使用條件為控制樣品在分析過程的解離，常

8、用緩沖液控制流動相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5（2~8）。太高的pH值會使硅膠溶解，太低的pH值會使鍵合的烷基脫落?；瘜W鍵合固定相的特點（1）傳質(zhì)快，表面無深凹陷，比一般液體固定相傳質(zhì)快；（2）壽命長，化學鍵合，無固定液流失，耐流動相沖擊；耐水、耐光、耐有機溶劑，穩(wěn)定；（4）選擇性好，可鍵合不同官能團，