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1、●l嚏Lr，II■r●●o1學位論文獨創(chuàng)性聲明IIIIII／111IIIIIIIIIIII111IIIllIIIll0Y1890775本人承諾：所呈交的學位論文是本人在導師指導下所取得的研究成果。論文中除特別加以標注和致謝的地方外，不包含他人和其他機構(gòu)已經(jīng)撰寫或發(fā)表過的研究成果，其他同志的研究成果對本人的啟示和所提供的幫助，均已在論文中做了明確的聲明并表示謝意。學位論文作者簽名：習)函塹．學位論文版權(quán)的使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解遼寧師范大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，及學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)
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3、tacea)，鰓足亞綱(Subc]assBranchiopoda)，無甲目(OrderAnostaca)，鹵蟲科(FamilyArtemiidae)，鹵蟲屬(GenusArtemia)。是分布于內(nèi)陸鹽湖和海岸鹽田中的小型甲殼動物。Notch信號通路是通過細胞問相互作用來調(diào)節(jié)生物體生長發(fā)育的一個十分保守的信號通路。Notch信號通路在脊椎動物和無脊椎動物的發(fā)育過程中，對細胞命運的決定、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、器官的形成及體節(jié)的發(fā)生都有重要的作用。在果蠅以及哺乳動物中Notch的信號通路已經(jīng)進行了深入的研究。通過本實驗的研
4、究可以為Notch信號通路在鹵蟲中的研究提供參考價值。本研究根據(jù)美國鹵蟲Notch基因的EST片段序列，以中國鹵蟲cDNA為模板克隆出一條基因序列，利用NCBI序列同源性比對，結(jié)果顯示該片段為Notch家族同源序列。結(jié)構(gòu)域的分析結(jié)果表明，該序列具有Notch家族保守的ANK結(jié)構(gòu)域。根據(jù)這段序列設(shè)計引物進行RT—PCR后采用染色體步移技術(shù)在3’端共擴增得到了881bp的片段。通過整體免疫組化技術(shù)對中國鹵蟲不同發(fā)育時期Notch基因的表達部位進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Oh，5h以及l(fā)OhNotch在原腸胚和無節(jié)幼體早期的表
5、達范圍較廣泛且平均，15h到40hNotch主要在鹵蟲無節(jié)幼體的頭胸部表達，在20h到40h腹部兩側(cè)開始出現(xiàn)少量表達，3d這一時期的Notch表達部位主要集中在頭胸部、腹部表面及腸道，5d的表達部位除集中在頭胸部、腹部表面及腸道外，在附肢處也出現(xiàn)了部分表達，到7d時，附肢和腹部表面、頭胸部、腸道內(nèi)側(cè)及體節(jié)成為了主要的表達部位。為了分析Notch的表達和胚胎發(fā)育的關(guān)系，本研究首次采用實時定量PCR分析了中國鹵蟲不同胚胎發(fā)育時期Notch基因的相對表達量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Notch在中國鹵蟲不同發(fā)育時期的表達量不同，在0小
6、時到10天之間，出現(xiàn)兩次高峰，以20h前后相對表達量最高，其余時期Notch表達量隨器官發(fā)生與身體發(fā)育情況而變化。推測Notch在鹵蟲的胚胎發(fā)育與體節(jié)和器官的發(fā)生中起到重要的作用，對胚胎神經(jīng)發(fā)育、細胞生長以及分化等一系列生理生化過程起到了一定的調(diào)節(jié)作用。關(guān)鍵詞：中國鹵蟲；Notch基因；整體免疫組化；實時熒光定量PCR●-1'▲Notch在中國鹵蟲不同發(fā)育時期的表達模式ExpressionPatternsinDifferentDevelopmentalStagesofNotchGeneofArtemiasini
7、caAbstractArtemiasinicabelongstoPhylumArthropoda，ClassCrustacea，SubclassBranchiopoda，OrderAnostaca，F(xiàn)amilyArtemiidaeandGenusArtemia．Assmallcrustaceans，itiSdistributedininlandsaltlakesandcoastalsalt。Notchsignalingpathwayisalsoconservedduringtheevolutionofthein
8、teractionbetweencellstoregulatethebiologicaldevelopment111eⅣrD砌signalingpathwayfunctionsinthedevelopmentprocessesbetweenvertebrateandinvertebrates，includingeellfatedecision,nervoussystemdevelopm
