bcl-2高表達(dá)誘導(dǎo)頭頸部鱗癌細(xì)胞部分emt、促進(jìn)其侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制研究

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1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文Bcl--2高表達(dá)誘導(dǎo)頭頸部鱗癌細(xì)胞部分EMT、促進(jìn)其侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制研究姓名：左建宏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：肖志強(qiáng)201209博士學(xué)位論文中文摘要摘要頭頸部鱗癌(Headandnecksquamouscellcarcinoma，HNSCC)是一種嚴(yán)重威脅人類生命和健康的惡性表皮腫瘤，為世界六大常見惡性腫瘤之一。由于頭頸部特殊的解剖結(jié)構(gòu)和復(fù)雜的功能，HNSCC的診斷與治療一直是我們面臨的挑戰(zhàn)之一。對(duì)于早期HNSCC，手術(shù)或放療均能獲得良好的效果；但遺憾的是60％的HNSCC就診時(shí)已屬晚期(Ⅲ、Ⅳ期)，5年生存率徘徊在1

2、0％---20％之間，況且，在過去50年，生存率仍然沒有明顯提高。HNSCC易發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移，而且高頻率的微轉(zhuǎn)移臨床難以發(fā)現(xiàn)。因此，揭示HNSCC侵襲與轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要的意義。Bel．2基因是一種重要的抗凋亡的基因，在許多生物過程如胎盤的發(fā)育、細(xì)胞歸巢、腫瘤多藥耐藥、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、血管新生以及基因調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。50％以上的腫瘤有Bcl．2高表達(dá)，HNSCC也不例外，通常Bel．2高表達(dá)的腫瘤病人療效以及病人預(yù)后差，且與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。然而，Bcl．2高表達(dá)促進(jìn)ttNSCC侵襲與轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚未闡明。本文研究Bcl-2高表達(dá)在HNSCC侵襲與轉(zhuǎn)移中的作

3、用及其機(jī)制。為探討B(tài)cl．2高表達(dá)對(duì)HNSCC細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響，在建立Bcl．2高表達(dá)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HNSCC細(xì)胞株的基礎(chǔ)上，皮下接種腫瘤細(xì)胞于BALB／c鼠，觀察Bcl．2高表達(dá)對(duì)HNSCC細(xì)胞體內(nèi)致瘤能力的影響；BALB／c鼠尾靜脈注射腫瘤細(xì)胞，觀察Bcl．2高表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞肺部轉(zhuǎn)移能力的影響；采用細(xì)胞侵襲、運(yùn)動(dòng)和遷移試驗(yàn)等方法分析Bcl．2高表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞體外侵襲與轉(zhuǎn)移能力的影響；應(yīng)用FACS檢i貝t]Bcl．2高表達(dá)對(duì)細(xì)胞表面黏附分子(Integrina2，Integrina3，IntegrinIIV,Integrina5，Integrina6，Int

4、egrin131和Integrin134)表達(dá)的影響。研究結(jié)果顯示：Bcl．2博士學(xué)位論文中文摘要高表達(dá)增強(qiáng)HNSCC細(xì)胞的體內(nèi)致瘤能力和肺轉(zhuǎn)移能力，提高HNSCC細(xì)胞的體外運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲能力，降低HNSCC細(xì)胞黏附能力和細(xì)胞表面Integrina2和Inte勘uap1的表達(dá)。為研究Bel-2高表達(dá)促進(jìn)刪SCC細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制，應(yīng)用Westernblotting，F(xiàn)ACS，Immunostaining，RT-PCR和Real—timePCR等方法檢測(cè)Bcl．2高表達(dá)對(duì)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白(E．cadheriIl’Cytokeratin，ZOI和Ds93等)和間質(zhì)

5、細(xì)胞標(biāo)志蛋白(N-cadherin,Fibronecfin和V'maentin)表達(dá)的影響等；采用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析Bcl．2對(duì)N-cadherin啟動(dòng)子活性的影響等；明膠酶譜法研究Bcl．2高表達(dá)對(duì)金屬基質(zhì)蛋白質(zhì)酶MMP．9的影響；應(yīng)用siRNA下調(diào)N-cadherin的表達(dá)，探討N-eadherin對(duì)轉(zhuǎn)移和侵襲的影響；用ERK，F(xiàn)GFR,EGFR阻斷劑U0126，PDl74073和AGl478分別阻斷其生物學(xué)功能，觀察相關(guān)信號(hào)通路在Bel．2促進(jìn)心SCC細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。結(jié)果顯示：Bcl．2高表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生了類似上皮．間質(zhì)轉(zhuǎn)型(EMD的形態(tài)變化

6、，下調(diào)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白(E．cadherin，Cytokeratin，Z01和Ds醪等)的表達(dá)，上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋I蘭I(N-cadherin，F(xiàn)ibroneetin和、rrmentin)的表達(dá)；Bcl．2能激活N．cadhcrin的啟動(dòng)子的活性并上調(diào)MMP．9的表達(dá)；Bcl．2通過N-cadherin／FGFR撇信號(hào)通路促進(jìn)HNSCC細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移。研究表明：(1)Bcl．2高表達(dá)增強(qiáng)HNSCC細(xì)胞體外和體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移能力：(2)Bcl一2高表達(dá)誘導(dǎo)HNSCC細(xì)胞發(fā)生類似EMT的細(xì)胞表型變化；(3)Bcl．2高表達(dá)通過N．cadh枷GFR厄砌o1／2／MMP．9信

7、號(hào)通路促進(jìn)烈SCC細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。我們的結(jié)果首次報(bào)道：Bel．2具有調(diào)控瑚峪CC細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的功能。關(guān)鍵詞：Bcl一2，頭頸部鱗癌，轉(zhuǎn)移，N．鈣黏附蛋白，基質(zhì)金屬蛋白酶．9II博士學(xué)位論文英文摘要ABSTRACTHeadandNeckSquamousCellCarcinoma(HNSCC)isseriousthreattohumanlifeasamalignantepidermiscancer,whichhasbecomeoneofsixcommoncancerintheworld．DiagnosisandtreatmentofHNSCChasbeenoneo

8、fthec