外源性視黃酸誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的研究

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1、分類號:R541學(xué)校代碼:4510密級:公開編號：0902072碩士學(xué)位論文外源性視黃酸誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的研究學(xué)科專業(yè):內(nèi)科學(xué)研究方向:心血管疾病流行病學(xué)研究研究生姓名:聶園園學(xué)號:Y0902072學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位導(dǎo)師姓名:仇小強(qiáng)教授二O一二年六月獨創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得（注：如沒有其他需要特別聲明的，本欄可空）或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)

2、位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日----------------------------------------------------------------學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解桂林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采

3、用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》、《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽字：簽字日期：年月日簽字日期：年月-2-目錄中文摘要………………………………………………………………2ABSTRACT……………………………………………………………4英漢縮略詞對照表…………………………………

4、…………………………6前言……………………………………………………………………7實驗一視黃酸誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的檢測………………………8材料與方法………………………………………………………8結(jié)果…………………………………………………………………11討論…………………………………………………………………14實驗二RA對乳鼠心肌細(xì)胞Fas,Fasl,Caspase3,Pax-8表達(dá)的影響……17材料與方法…………………………………………………………………17結(jié)果……………………………………………

5、…………………………24討論…………………………………………………………………27總結(jié)…………………………………………………………………30參考文獻(xiàn)………………………………………………………………31綜述……………………………………………………………………………34攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄………………………………………41致謝……………………………………………………………………………42外源性視黃酸誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的研究中文摘要目的：研究外源性視黃酸（Retinoicacid,RA）對

6、乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響，并研究乳鼠心肌細(xì)胞中Fas,Fasl,Casepase-3,Pax-8細(xì)胞調(diào)控因子的表達(dá)水平，分析RA誘導(dǎo)心肌損傷的機(jī)制。方法：1.體外培養(yǎng)乳鼠原代心肌細(xì)胞以及明確心肌細(xì)胞干預(yù)的最佳時間：在無菌條件下取出Balb/c乳鼠心臟，采用胰酶-差速貼壁法分離并純化獲得乳鼠心肌細(xì)胞，并進(jìn)行原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)。2.RA干預(yù)心肌細(xì)胞后進(jìn)行指標(biāo)的檢測：設(shè)置的空白對照組為選用含20%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)心肌細(xì)胞；實驗組分別使用含不同濃度視黃酸的培養(yǎng)基干預(yù)心肌細(xì)胞，在用藥干預(yù)后的0

7、h、12h、24h、48h使用倒置顯微鏡觀察心肌細(xì)胞形態(tài)并動態(tài)記錄細(xì)胞搏動力；用MTT法來檢測心肌細(xì)胞的抑制率；流式細(xì)胞儀檢測心肌細(xì)胞凋亡率；3.RA干預(yù)心肌細(xì)胞后Fas、Fasl、Caspase-3、Pax-8調(diào)控因子檢測：Westernblot測定Fas、Fasl、Caspase-3、Pax-8蛋白的表達(dá)水平。RT-PCR檢測Fas、FaslmRNA表達(dá)水平。結(jié)果：1.成功培養(yǎng)Balb/c乳鼠心肌原代細(xì)胞。培養(yǎng)72h的心肌細(xì)胞生長旺盛，表現(xiàn)為搏動力強(qiáng)，心肌細(xì)胞增殖逐漸進(jìn)入平臺期，為最佳的細(xì)胞

8、干預(yù)期。2.視黃酸濃度≥2umol/L時能顯著抑制正常Balb/c乳鼠心肌細(xì)胞的生長，使細(xì)胞的搏動力減弱、凋亡增加，同時干預(yù)的藥物濃度越高、時間越長，抑制越明顯。3.與對照組相比，2umol/LRA組隨作用時間的延長，F(xiàn)as、Fasl、Caspase-3蛋白的表達(dá)逐漸增強(qiáng)（P<0.05）；與之相對應(yīng)的是Pax-8蛋白的表達(dá)則逐漸降低（P<0.05）；Fas、FaslmRNA表達(dá)逐漸增強(qiáng)（P<0.05）。結(jié)論：1.采用胰酶-差速貼壁法及化學(xué)藥物抑制法能獲取存活率高、純度高的心肌原代細(xì)胞；心肌細(xì)胞培