植物病原真菌乙酰乳酸合成酶(als)及其抑制劑的研究

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1、加夕≥Z掌萬方數(shù)據(jù)碩士學(xué)位論文論文題目⑧提交日期2014．06萬方數(shù)據(jù)浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得浙江太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：葉繃寥簽字腳如，嚴(yán)年6月0日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解浙江太堂有權(quán)保

2、留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)浙塹太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者始葉朗彥導(dǎo)師簽名．簽字日期：如f甲年6月c>日簽字日期：加壚年易月77日、占衛(wèi)萬方數(shù)據(jù)致謝時(shí)光匆匆如白駒過隙，轉(zhuǎn)眼間我在浙江大學(xué)三年的求學(xué)生涯進(jìn)入了尾聲。在論文即將完成之際，我的心情無法平靜，從論文的選題到論文的順利完成，我接受過太多的幫助。在此，我要

3、對曾經(jīng)指導(dǎo)、幫助和陪伴過我的師長、同學(xué)和朋友表示誠摯的感謝和由衷的敬意。我的論文是在導(dǎo)師陳衛(wèi)良老師的悉心指導(dǎo)下完成的，從論文立題、實(shí)驗(yàn)構(gòu)思、技術(shù)方案、實(shí)際操作到結(jié)果分析、論文撰寫，無不傾注了導(dǎo)師的心血和智慧。三年來，陳老師在學(xué)習(xí)、科研和日常生活中的教誨和呵護(hù)，讓我充滿了感恩與感謝，您親力親為的工作作風(fēng)及平易近人的待人風(fēng)格將成為我今后工作和生活的一筆寶貴財(cái)富。在此，謹(jǐn)向我的導(dǎo)師陳衛(wèi)良老師表示我最誠摯的謝意!我要感謝浙江大學(xué)給予我一個(gè)展現(xiàn)自我、超越自我的平臺，感謝農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院和生物技術(shù)研究所三年來

4、對我的接納和培養(yǎng)，感謝各位老師在學(xué)習(xí)和生活上對我的教育和關(guān)懷，感謝實(shí)驗(yàn)室同窗們對我的關(guān)心和幫助，感謝我的室友和同學(xué)們給予我的照顧和包容!是你們讓我在研究生階段能不斷學(xué)習(xí)，不斷求知，不斷成長，度過了快樂而充實(shí)的三年時(shí)光。最后我要感謝二十多年來給予我無限關(guān)愛、理解和支持的父母、家人，是你們賦予我生命，給予我無私而偉大的愛，用你們的樂觀積極感染了我，你們更是促使我努力奮斗拼搏的不竭動(dòng)力!葉朝燕于浙江大學(xué)紫金港2014年6月萬方數(shù)據(jù)浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要紋枯病菌(Rhizoctoniasolani)和禾谷

5、鐮刀茵(Fusariumgraminearum)是禾本科作物的重要病原菌，其引起的水稻紋枯病等茵核病和小麥赤霉病等病害每年產(chǎn)生的損失巨大，危害十分嚴(yán)重。乙酰乳酸合成酶(Acetolactatesynth嬲e，ALS)是植物和微生物體內(nèi)三種支鏈氨基酸生物合成過程中影響第一階段的關(guān)鍵性酶，但并不存在于動(dòng)物體內(nèi)，其作為一種重要的除草劑靶標(biāo)已被廣泛證實(shí)和應(yīng)用，但對于真菌ALS的研究甚少。本文旨在探索以ALS為靶標(biāo)開發(fā)紋枯病菌和禾谷鐮刀菌病害防治藥劑的可能性。研究結(jié)果如下：1．選取兩種植物病原真菌紋枯病菌、禾

6、谷鐮刀菌和兩種植物水稻(日本晴)、油菜(上海四月慢)為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)行ALS制備研究。在借鑒前人研究方法和經(jīng)驗(yàn)的前提下，本試驗(yàn)從病原菌接種方法、接種時(shí)期、粗酶提取、酶活性測定等四個(gè)ALS活性鑒定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)入手，總結(jié)了一套可用于真菌及植物ALS活性和離體化合物抑制的測定方法，為進(jìn)行ALS活性特異性研究、ALS抑制化合物篩選研究等提供了良好的基礎(chǔ)和借鑒。2．利用根據(jù)已有ALS抑制劑結(jié)構(gòu)特點(diǎn)設(shè)計(jì)合成的31種嘧啶氧芐胺類化合物，以雙草醚為對照，測定了100ppm濃度下它們對水稻、油菜、紋枯病菌和禾谷鐮刀菌AL

7、S的抑制效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)同一化合物對不同ALS的作用效果存在差異：能抑制紋枯病菌ALS活性的有6種，能抑制禾谷鐮刀菌ALS活性的有10種，能抑制水稻ALS活性的有12種，能抑制油菜ALS活性的有8種。僅對一種生物類型ALS產(chǎn)生抑制作用的有11種，能對兩種生物類型ALS產(chǎn)生抑制作用的有4種，能對三種生物類型ALS產(chǎn)生抑制作用的有3種，對四種ALS均能產(chǎn)生抑制作用的有2種。能抑制多種生物類型的化合物對不同類型的ALS的抑制率存在差異。3．通過100ppm濃度下31種化合物對紋枯病菌和鐮刀菌生長的抑制效果分

8、析，發(fā)現(xiàn)對紋枯病菌生長有較明顯抑制作用的有27種，對禾谷鐮刀菌生長有較明顯抑制作用的有11種。比對待測化合物對兩種真菌ALS和對菌絲生長的抑制率，發(fā)現(xiàn)兩者之間存在差異。能抑制紋枯病菌生長而對其ALS無明顯作用的化合物有22種，能抑制紋枯病菌ALS而對其菌絲生長無明顯作用的有1種，對ALS和菌絲生長均能抑制的有5種；能抑制禾谷鐮刀菌生長而對其ALS無明顯作用的化合物有5種，能抑制禾谷鐮刀菌ALS而對其菌絲生長無明顯作用的有4種，均能抑制ALS和菌絲生長的有6種。4．對其