1摘要核桃系胡桃科核桃屬植物

《1摘要核桃系胡桃科核桃屬植物》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、克隆平末端的目的片段時，為最大量地獲得“正確”的連接產(chǎn)物，載體和目的DNA在連接反應(yīng)中的比例必須適當(dāng)。載體與目的DNA的摩爾比過高，會造成大量的環(huán)化空質(zhì)粒，既可能是單一質(zhì)粒的環(huán)化，也可能是多個質(zhì)粒聚集而形成的環(huán)化。摩爾比如果過低，則會產(chǎn)生過量的在大小、方向和組成上各不相同的線狀和環(huán)狀的均質(zhì)或異質(zhì)性多聚體。為此，每一重組體中外源DNA的連接方向和插入數(shù)量都必須用限制酶酶切圖譜分析或其他方法加以鑒定。本實(shí)驗(yàn)以載體與目的片段的摩爾比為1:10進(jìn)行連接，同時應(yīng)用三種不同的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行多重鑒定，取得了滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。???連接體系中高濃度的平端，也是獲得平端連接的必要條件。

2、在載體和目的片段的摩爾比適當(dāng)?shù)臈l件下，盡量加大各自的摩爾濃度，以縮小載體片段末端與目的片段末端在空間上的距離，從而加大二者的碰撞幾率，減小載體片段的自身環(huán)化連接。本實(shí)驗(yàn)主要從以下幾點(diǎn)來加大連接體系中載體片段和目的片段的平端濃度：1）提取質(zhì)粒DNA時盡量做到高濃度、高質(zhì)量；2）酶切時，在不影響酶切效果的情況下，加大酶切體系中質(zhì)粒DNA的濃度；3）凝膠電泳分離目的DNA時，加入大量酶切產(chǎn)物，膠回收時盡量少帶膠，切下的膠中目的片段的濃度盡量高，從而使回收的溶液中DNA片段的濃度盡量高；4）連接體系盡可能?。ㄒ话?~10μl），體系中除T4噬菌體DNA連接酶和相應(yīng)的緩沖液外，

3、全部由兩種膠回收溶液按特定比例填充。???低濃度（0.5mmol/L）的ATP和極高濃度的連接酶也是平端連接的必要條件。在反應(yīng)混合物中，ATP作為10×連接緩沖液的組分，給載體和外源DNA片段提供了更為廣闊的空間。本實(shí)驗(yàn)中廠家提供的連接緩沖液含有ATP，因而沒有另外加入ATP。此外，平端連接是低效反應(yīng)，連接反應(yīng)的時間相對較長，所以應(yīng)加入極高濃度的連接酶。???去除載體5’端的磷酸基可防止質(zhì)粒DNA的自身環(huán)化，這一點(diǎn)在不少書籍中提到。但對于去磷酸化處理是否有利，各家的觀點(diǎn)不盡相同，有很多研究者對去磷酸化的作用持有疑問。毫無疑問，去除5’端的磷酸基可抑制質(zhì)粒DNA的自身環(huán)

4、化，因而降低帶有“空”質(zhì)粒的細(xì)菌克隆所產(chǎn)生的背景。因而，也會經(jīng)常發(fā)生同時使帶有重組質(zhì)粒的克隆減少的情況。此外，去磷酸后，必須對堿性磷酸酶進(jìn)行充分滅活，以保證下一步的連接反應(yīng)順利進(jìn)行，但滅活過程中進(jìn)行抽提時，大大降低了質(zhì)粒DNA的濃度，不容易操作。本實(shí)驗(yàn)初期嘗試應(yīng)用堿性磷酸酶去除載體5’端的磷酸基，效果并不理想。鑒于這些原因，本實(shí)驗(yàn)不推薦使用這一方法。???在連接反應(yīng)混合物加入一些可促進(jìn)大分子群聚作用并可導(dǎo)致DNA分子凝聚成聚集體的物質(zhì)，如聚乙二醇或氯化六合高鈷，可以使如何取得適當(dāng)濃度的平端DNA問題迎刃而解。但考慮到這些物質(zhì)的加入也增強(qiáng)了連接產(chǎn)物的硬度，大大降低了連接

5、產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌的效率，所以本實(shí)驗(yàn)并沒有應(yīng)用這類物質(zhì)。1摘要核桃系胡桃科核桃屬植物，在我國分布范圍廣闊。本文首先以普通核桃的不同部分為研究對象，確定各部分多酚類物質(zhì)的組成及含量的分布；再以普通核桃、不老屯核桃、美國黑核桃為試驗(yàn)材料，重點(diǎn)研究不同品種核桃青皮中多酚類物質(zhì)的成分、含量及抗氧化活性。試驗(yàn)結(jié)果表明：核桃中對人體有益的多酚類物質(zhì)主要集中在青皮、種皮部分，且青皮中多酚類物質(zhì)的絕對含量相對較高；在不同品種核桃青皮的多酚類物質(zhì)中，從總酚含量、單寧含量及胡桃醌含量看，美國黑核桃青皮均最高，其次為普通核桃青皮，不老屯核桃青皮均最少。從所擁有的多酚類物質(zhì)種類數(shù)看，普通核桃青

6、皮的最多，其次為美國黑核桃青皮，不老屯核桃青皮最少。在三個品種的酚酸類物質(zhì)中，沒食子酸含量均是最高的，且從其含量看，不老屯核桃青皮最高，其次為美國黑核桃青皮，普通核桃青皮最少。在三個品種的黃酮類物質(zhì)中，蘆丁的含量均是最高的，且從其含量上看，美國黑核桃青皮最高，其次為普通核桃青皮，不老屯核桃青皮最少。從抗氧化性看，利用DPPH自由基的反應(yīng)體系進(jìn)行清除自由基實(shí)驗(yàn)，美國黑核桃青皮清除自由基的能力最強(qiáng)，其次為不老屯核桃青皮，普通核桃青皮最弱。關(guān)鍵詞：核桃青皮；多酚類物質(zhì)；抗氧化性2DeterminationofthePolyphenolsandtheAntioxidantAc

7、tivityintheWalnutGreenRindAbstractWidespreadinChina,walnut(JulansregiaL)isamemberplantofwalnutgenerainthewalnutfamily.Thepaperfirstmadeastudyondifferentpartsofwalnuttodeterminethetypesandcontentofpolyphenolsineachpart.Thenthreetypesofwalnuts(i.e.walnut,BulaotunwalnutandEasternB