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《赤丸蕪菁brchs表達(dá)特性及啟動(dòng)子特性分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文赤刃蕪菁BrCHS表達(dá)特性及啟動(dòng)子特性分析姓名：張荔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：李玉花20110629摘要查爾酮合成酶(刪S)是高等植物體內(nèi)花色素合成途徑中的第一個(gè)關(guān)鍵酶，它催化的反應(yīng)是類黃酮合成途徑中的重要步驟，CHS基因表達(dá)量的增加或減少都可能導(dǎo)致花色產(chǎn)生變異。目前的研究發(fā)現(xiàn)，Uv．A可以特異誘導(dǎo)花青素合成依光型津田蕪菁體內(nèi)倒S基因的表達(dá)。為了研究在非依光型赤丸蕪菁中CHS的光誘導(dǎo)表達(dá)特性和啟動(dòng)子的相關(guān)活性，本論文以非依光型花青素合成的赤丸蕪菁為試驗(yàn)材料，克隆了BrCHS基因及啟動(dòng)子片段，對(duì)BrCHS拷貝數(shù)和表達(dá)特性進(jìn)行了分析，并對(duì)獲得
2、的基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析非依光型花青素合成的赤丸蕪菁中CHS基因在不同組織中和在Uv詛光誘導(dǎo)下的表達(dá)模式，并轉(zhuǎn)化煙草葉片對(duì)啟動(dòng)子進(jìn)行分析，檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)活性。研究的主要結(jié)果如下：l赤丸蕪菁CHS的克隆及拷貝數(shù)從赤丸蕪菁中克隆了BrCHS的基因片段，將獲得的1263bpBrCHS基因序列片段與GenBank中同源序列進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果表明該片段與GenBank中Brassicanapuschalconesynthase(Chs)gene，exonl，2andpartia．(登錄號(hào)為GQ983005．1)的部分序列具有98％的同源性，其中含有兩個(gè)
3、外顯子和一個(gè)內(nèi)含子。Southern雜交結(jié)果表明，BrC：?了：躔因在赤丸蕪菁基因組中至少有四個(gè)拷貝，屬于多基因家族。2．赤丸蕪菁CHS的表達(dá)特性在檢測(cè)的不同組織中，非依光型赤丸蕪菁a弼在下根皮的表達(dá)最多，上根皮次之，葉子中最少。赤丸蕪菁CHS在UV-A誘導(dǎo)下幼苗的表達(dá)特性說(shuō)明，UV-A能夠誘導(dǎo)BrCHS的表達(dá)，且在幼苗下胚軸的中間部位受誘導(dǎo)表達(dá)最明顯，推測(cè)在該部位存在光特異誘導(dǎo)花青素合成的調(diào)控途徑，說(shuō)明存在著光誘導(dǎo)的組織特異性表達(dá)。3赤丸蕪菁CHS基因5，非翻譯區(qū)具有啟動(dòng)活性克隆了赤丸蕪菁BrCHS的5’非翻譯區(qū)，結(jié)果表明該片段與GenBank中Brassicarapasubs
4、p．pekinensiscloneKBrB008108(登錄號(hào)為ACl89212)的全長(zhǎng)序列具有99％的同源性。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，該序列除了具有一般真核生物啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)所普遍具有的保守序列如CAATbox和TATAbox等保守序列外，找到了很多與光誘導(dǎo)相關(guān)的保守序列，如：ACE、ATCT-motif,BoxII、G—Box、GATA—motif,GTl一motif,TCT-motif,Spl和chs-Unit1ml。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)將BrCHS啟動(dòng)子重組體轉(zhuǎn)化煙草，在穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因煙草中定性分析啟動(dòng)子的活性，通過(guò)GUS組織化學(xué)染色法對(duì)CHS基因的表達(dá)情況進(jìn)行了檢
5、測(cè)，結(jié)果表明克隆的BrCHS基因5’非翻譯區(qū)序列具有啟動(dòng)子活性。關(guān)鍵詞：CHS；啟動(dòng)子；UVA；功能分析；轉(zhuǎn)基因煙草AbstractChalconesynthase(CHS)isakeyenzymeduringthepathwayofanthocyaninbisynthesisinhigherplants．Itcatalyzesthefirstcommittedstepintheflavonoidpathway．AnincreaseordecreaseintheexpressionofCHSgenemayleadtochangeofflowercolour．Accordingto
6、theformerresearch,UV—AcallinduceCHSgeneexpressionspecificlyandsynthesizeanthocyanininturnip‘Tsuda’whichissensitivetolightwhilesynthesizinganthocyanin．InordertostudytheexpressioncharacterandthepromoteractivityofCHS,YurugiAkamaru,whichhasacharacteristicofthelight-independentanthocyaninbiosynthe
7、sis，Wasusedasmaterials．CHSgeneanditspromoterwereclonedbyPCR,genecopynumbersandgeneexpressioncharacteristicsofCHSwereanalyzed，nesequenceofobtainedgenehasbeenanalyzedbybioinformatictools．ExpressionpatternsofCHSgeneinducedbyUltraviolet-AinYurugi
