猴頭菇多糖對(duì)胃腸黏膜保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

《猴頭菇多糖對(duì)胃腸黏膜保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名—鰩日期：加壚J，月(妒關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥

2、大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名論文導(dǎo)師簽名轍日期兇壚年廠月帥中文摘要中又捅要目的：通過(guò)觀察猴頭菇多糖對(duì)無(wú)水乙醇、吲哚美辛、醋酸、水浸拘縛所致大鼠胃黏膜損傷的作用，研究猴頭菇多糖對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用及其作用機(jī)制，并指導(dǎo)配方中的有效添加劑量；通過(guò)觀察猴頭菇多糖對(duì)LPS誘導(dǎo)Caco．2細(xì)胞及Caco一2／RAW264．7共培養(yǎng)體系應(yīng)激炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用，在細(xì)胞水平研究猴頭菇多糖對(duì)腸黏膜屏障的保護(hù)作用。方法：l、

3、猴頭菇多糖對(duì)胃黏膜保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究采用無(wú)水乙醇致大鼠胃黏膜損傷模型觀察猴頭菇多糖對(duì)急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用，動(dòng)物隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型組對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、猴頭菇多糖各劑量組。以猴頭菇多糖的人體最小參考劑量(0．29／d)的5倍作為大鼠的最小給藥劑量(HEPl)，人體最大參考劑量(0．49／d)的20倍作為最大給藥劑量(HEP4)，再在最大、最小劑量間再設(shè)置2個(gè)梯度(HEP2、HEP3)。劑量設(shè)置分別為：HEPl17mg／kg，HEP268mg／kg，HEP3102mg／kg，HEP4136mg／kg。實(shí)驗(yàn)以無(wú)水乙醇模型大鼠

4、的胃黏膜潰瘍指數(shù)為根據(jù)篩選出有效劑量。在篩選出有效劑量的基礎(chǔ)上，分別采用吲哚美辛、醋酸、水浸拘縛致大鼠胃黏膜損傷模型以進(jìn)一步觀察猴頭菇多糖對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用并探討其保護(hù)機(jī)理。SD大鼠，雄性，180—2209，隨機(jī)分空白對(duì)照組、模型組對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、HEP劑量組。灌胃給藥1次／d，共lO天，對(duì)照組給予等量蒸餾水。(1)末次給藥1h后，除空白組外，動(dòng)物灌胃吲哚美辛80mg／kg，空白組給予等體積蒸餾水。7h后處死動(dòng)物，取出全胃，測(cè)量胃黏膜潰瘍面積，酶聯(lián)免疫法測(cè)定胃黏膜組織勻漿上清中的前列腺素(PGE2)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)含

5、量。(2)給藥前，以微量注射器平刺入漿膜注射30％醋酸制備大鼠慢性胃黏膜損傷模型，末次給藥后禁食24h處死動(dòng)物，取出全胃，測(cè)量胃黏膜潰瘍面積，酶聯(lián)免疫法測(cè)定胃黏膜組織勻漿上清中的堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)含量，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法測(cè)定轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF．Q)mRMA表達(dá)的影響。(3)末次給藥O．5h后固定于金屬網(wǎng)籠內(nèi)，直立浸于水溫20士1℃的水槽中6h制備大鼠應(yīng)激性胃黏膜損傷模型，10％水合氯醛麻醉動(dòng)物，于劍突下正中切開(kāi)腹前壁，于胃體及胃竇處各作一個(gè)長(zhǎng)度0．5cm的橫向切口，運(yùn)用激光多普勒灌注監(jiān)視儀測(cè)定胃體及胃竇處血

6、流量(GMBF)。以激光多普勒信號(hào)表示血流量的相對(duì)數(shù)值，以胃體及胃竇處血流量均值表示胃黏膜血流量；處死動(dòng)物，取出全胃，測(cè)量胃黏膜潰瘍面積。2、猴頭菇多糖對(duì)腸黏膜保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究：將Caco一2細(xì)胞以105濃度接種在Transwell轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)槽的微孔濾膜上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)基為DMEM高糖(pH7．4，含10％胎牛血清，2mmol·L～L．谷氨酰胺，10mmol·L～Hepes、NEAA、青鏈霉素)，于37。C，5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h換液，以后每隔48h換液，約4-6d細(xì)胞融合達(dá)90％進(jìn)行傳代。采用形態(tài)學(xué)觀察、跨膜電阻測(cè)定、表

7、觀滲透系數(shù)測(cè)定和堿性磷酸酶活性檢測(cè)對(duì)細(xì)胞模型進(jìn)行評(píng)估。以脂多糖(LPS)刺激1h引起Caco一2細(xì)胞及Caco．2／RAW264．7共培養(yǎng)體系應(yīng)激炎癥反應(yīng)，加入猴頭菇多糖干預(yù)24h，收集下側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)液檢測(cè)相關(guān)炎癥因子的分泌情況。(1)細(xì)胞培養(yǎng)至15d，光鏡下觀察細(xì)胞分布均勻，邊界清晰，以單層致密的方式排列時(shí)，耳P．--I進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在Transwell板上部加LPS50pg／ml，lh后在上部加入猴頭菇多糖500pg／ml，24h后取下側(cè)培養(yǎng)液酶聯(lián)免疫法測(cè)定細(xì)胞因子IL．6，IL一8，IL．10，IL一12，TNF．Ⅱ，IFN吖的含量

8、。(2)細(xì)胞培養(yǎng)至15d，光鏡下觀察細(xì)胞分布均勻，邊界清晰，以單層致密的方式排列時(shí)，在Transwell板下部以105接種小鼠單核巨噬細(xì)胞(洲264．7)，共培養(yǎng)24h。在Transwell板上部加LPS50pg／ml，lh后再加入猴頭菇多糖500btg／ml，