抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)牙鲆(paralichthys olivaceus)利用大豆蛋白源的影響

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1、中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)牙鲆（Paralichthysolivaceus）利用大豆蛋白源的影響姓名：陳偉申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：水生生物學(xué)指導(dǎo)教師：麥康森20090601抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)牙鲆(Paralichthysolivaceus)禾ll用大豆蛋白源的影響摘要本文選擇我國典型的肉食性魚類牙鲆(Paralichthysolivaceus)為研究對(duì)象，采用傳統(tǒng)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)、體外細(xì)胞培養(yǎng)和胃內(nèi)灌喂三種不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ奖容^研究影響牙鲆利用大豆蛋白的因素，闡明水生動(dòng)物不能有效利用植物性蛋白源的原因。研究內(nèi)容包括：(1)大豆皂甙對(duì)牙鲆攝食、生長和組織學(xué)的影響；

2、(2)大豆異黃酮對(duì)牙鲆攝食、生長和組織學(xué)的影響；(3)三種大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)牙鲆腸上皮細(xì)胞形態(tài)、存活率、增殖、膜完整性和功能的影響；(4)等攝食條件下用豆粕替代魚粉對(duì)牙鲆生長、飼料效率和表觀消化率的影響。主要研究結(jié)果如下：(1)以魚粉為主要蛋白源，魚油為脂肪源，小麥粉為糖源，以三氧化二釔為外源性指示劑，制成4種等氮、等能(粗蛋白49．1％，總能20．1IO／g)的實(shí)驗(yàn)飼料，使飼料中大豆皂甙實(shí)際含量分別達(dá)到0(對(duì)照組)、0．08％、0．32％和0．64％，研究不同大豆皂甙含量對(duì)牙鲆(2．584-O．01g)攝食、生長、飼料效率、表觀消化率和組織學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)

3、在室內(nèi)循環(huán)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行，每個(gè)處理設(shè)置三個(gè)重復(fù)，每天投喂2次，達(dá)飽食水平。分別在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)開始、28d和結(jié)束時(shí)對(duì)牙鲆進(jìn)行稱重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著飼料中大豆皂甙水平的升高，牙鲆攝食率、平均體重、魚體粗脂肪含量和飼料粗蛋白表觀消化率均顯著下降p0．05)。與對(duì)照組相比較，無論在28d還是試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，飼料中添加0．64％大豆皂甙都顯著降低了牙鲆的平均體重護(hù)

4、甙在28d時(shí)的平均體重顯著低于對(duì)照組(尸<0．05)，但是試驗(yàn)結(jié)束時(shí)平均體重與對(duì)照組沒有顯著差異儼>0．05)。高濃度的大豆皂甙(O．64％)還造成了牙鲆肝臟和后腸組織的病理性變化。通過分析認(rèn)為，高含量的大豆皂甙顯著抑制了牙鲆的攝食和生長性能，因此在以大豆制品來替代魚粉飼喂牙鲆時(shí)不應(yīng)該忽略大豆皂甙的抗?fàn)I養(yǎng)作用。(2)以魚粉為主要蛋白源，魚油為脂肪源，小麥粉為糖源，以三氧化二釔為外源性指示劑，制成4種等氮、等能(粗蛋白49．1％，總能20．1KJ／g)實(shí)驗(yàn)飼料，使飼料中大豆異黃酮實(shí)際含量分別達(dá)到O(對(duì)照組)、O．1％、O．4％和0．8％，研究不同大豆異黃I

5、II酮含量對(duì)牙鲆(2．58-I-O．01曲攝食、生長、飼料效率、表觀消化率和組織學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)循環(huán)海水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行，每個(gè)處理設(shè)置三個(gè)重復(fù)，每天投喂2次，達(dá)飽食水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加O．1％和0．4％的大豆異黃酮對(duì)牙鲆攝食、生長、飼料效率、魚體組成、表觀消化率和組織學(xué)結(jié)構(gòu)均沒有顯著影響儼>0．05)。而與對(duì)照組相比較，飼料中添加O．8％大豆異黃酮顯著降低了牙鲆的平均體重、魚體的粗脂肪含量和飼料表觀消化率伊<0．05)，并造成了牙鲆后腸組織的病理性變化。通過分析認(rèn)為，如果飼料中大豆異黃酮的含量不超過0．4％，它對(duì)牙鲆的抗?fàn)I養(yǎng)作用不明顯。由于

6、一般大豆制品中大豆異黃酮的含量在0．1～0．3％，因此本文建議在使用大豆制品來替代魚粉飼喂牙鲆時(shí)可以不用考慮大豆異黃酮的抗?fàn)I養(yǎng)作用。(3)通過分離和原代培養(yǎng)牙鲆腸道上皮細(xì)胞，并以其為細(xì)胞模型，研究大豆中三種熱穩(wěn)定性抗?fàn)I養(yǎng)因子對(duì)其形態(tài)、存活率、增殖、膜完整性和功能的影響。本實(shí)驗(yàn)研究的三種抗?fàn)I養(yǎng)因子為大豆皂甙、植酸和棉子糖，其在培養(yǎng)液中的濃度分別為2、4和8gL．1。結(jié)果表明：與其他三個(gè)處理組相比(對(duì)照、植酸和棉子糖)，在培養(yǎng)液中添加2gL以的大豆皂甙顯著抑制牙鲆腸道上皮細(xì)胞的存活、增殖和細(xì)胞堿性磷酸酶活力儼<0．001)，并嚴(yán)重破壞了牙鲆腸上皮細(xì)胞細(xì)胞膜的

7、完整性，改變了細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)；與對(duì)照組相比，在培養(yǎng)液中添加4gL以的植酸顯著改變牙鲆腸上皮細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并抑制細(xì)胞的存活、增殖、細(xì)胞膜完整性和細(xì)胞堿性磷酸酶活力伊<0．05)i與對(duì)照組相比，在培養(yǎng)液中添加8gL。1的棉子糖對(duì)牙鲆腸道上皮細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、存活、增殖、細(xì)胞膜完整性和細(xì)胞堿性磷酸酶活力均沒有顯著影響儼>0．05)。本實(shí)驗(yàn)添加的濃度參考了這三種抗?fàn)I養(yǎng)因子在一般大豆制品中的含量，也是當(dāng)牙鲆攝食含有50％豆粕的飼料后它的腸上皮細(xì)胞所在環(huán)境的抗?fàn)I養(yǎng)因子含量，比其他以細(xì)胞為研究模型的報(bào)道要高。通過分析認(rèn)為，在使用大豆制品來替代魚粉飼喂牙鲆時(shí)應(yīng)重視大豆皂

8、甙和植酸對(duì)魚類腸道的損害作用，并設(shè)法去除，不過可以不用考慮棉子糖的抗?fàn)I養(yǎng)作用。(