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《disulfiram聯(lián)合cu對(duì)raji細(xì)胞及其裸鼠移植瘤生長(zhǎng)影響及分子機(jī)制的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、碩士學(xué)位論文Disulfiram聯(lián)合Cu對(duì)Raji細(xì)胞及其裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及分子機(jī)制的研究碩士研究生：查潔指導(dǎo)教師：徐兵教授摘要背景Burkitt’S淋巴瘤是一種侵襲性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤，疾病進(jìn)展快，死亡率高。雖然隨著化療及免疫治療等研究的進(jìn)展，Burkitt’S淋巴瘤患者的治療效果已有明顯改善，但復(fù)發(fā)及大劑量化療的毒副作用仍是影響淋巴瘤腫瘤療效進(jìn)一步提高的主要障礙；而新的分子靶向治療藥物也存在價(jià)格昂貴和耐藥問(wèn)題，從價(jià)廉且毒副作用小的傳統(tǒng)藥物中開(kāi)發(fā)具有抗淋巴瘤活性的“新用途"越來(lái)越引起重視。Disulfiram(DS)是一種能夠抑制醇脫氫酶的二
2、硫代氨基甲酸鹽藥物，已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用于抗酗酒，安全低毒且價(jià)格低廉。已有研究報(bào)道DS還具有抗腫瘤效應(yīng)，它對(duì)乳腺癌、結(jié)腸癌等多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞均具有抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用，另外，我們過(guò)去的研究也證實(shí)DS對(duì)白血病細(xì)胞具有抗腫瘤作用。DS作為一種二價(jià)金屬離子螯合物，能夠與Cu離子螯合形成DS／Cu復(fù)合物，DS／Cu能顯著提高DS誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用。但有關(guān)DS及DS聯(lián)合Cu對(duì)淋巴瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響及分子機(jī)制尚不明確，因此需進(jìn)一步探索其作用及分子機(jī)制。有關(guān)DS抗腫瘤作用機(jī)制的研究近年取得了不少新進(jìn)展，尤其在促凋亡機(jī)制方面，發(fā)現(xiàn)與多條信號(hào)傳導(dǎo)通路有關(guān)?；?/p>
3、性氧(ROS)包括過(guò)氧化氫(H202)、超氧陰離子(02。)、羥自由基(OH．)及脂質(zhì)過(guò)氧化物等，ROS不僅可作為一種毒性物質(zhì)介導(dǎo)炎性損傷，近年發(fā)現(xiàn)它還是信息家族分子中的重要成員之一，對(duì)摘要細(xì)胞具有廣泛的調(diào)節(jié)功能，在細(xì)胞凋亡中具有重要意義。ROS是細(xì)胞凋亡的早期信號(hào)，它可作用于線粒體，促使線粒體膜通透性改變、細(xì)胞色素C釋放，還能與caspase9前體、ATP／dATP形成凋亡體，然后激活caspase3、easpase9，進(jìn)而誘發(fā)easpase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使DNA斷裂，引起細(xì)胞凋亡，而損傷的線粒體能產(chǎn)生更多活性氧，進(jìn)一步引起細(xì)胞凋亡。研究表明腫瘤細(xì)胞R
4、OS水平略高于正常細(xì)胞，但由于有效的抗氧化機(jī)制的存在，腫瘤細(xì)胞對(duì)相對(duì)高水平的ROS是可以耐受。但在刺激信號(hào)作用下ROS進(jìn)一步升高，可觸發(fā)線粒體跨膜電勢(shì)降低，使線粒體釋放細(xì)胞色素C而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。C．Jun氨基末端激酶(ⅢK)是MAPK重要成員之一，JNK也是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞凋亡激活的通路之一，活化的JNK能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，特別是各種應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。C-jun蛋白是JNK的作用底物，在外界作用刺激下，JNK表達(dá)上調(diào)或磷酸化水平上調(diào)將通過(guò)誘導(dǎo)C．Jun蛋白的氨基末端發(fā)生磷酸化，作為凋亡信號(hào)傳遞到細(xì)胞核內(nèi)部，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生。在眾多的外界應(yīng)激因素中活性氧是非常常
5、見(jiàn)的一種，近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)ROS的大量產(chǎn)生使得JNK持續(xù)激活，最終導(dǎo)致細(xì)胞由生存走向死亡。因此JNK介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及活性氧在這一途徑中的作用可能是DS誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋亡的一個(gè)重要分子機(jī)制。在多種腫瘤細(xì)胞中，NF．KB是活化的，NF．KB能夠調(diào)控許多對(duì)腫瘤細(xì)胞存活、分化和凋亡非常重要的基因的表達(dá)。通常所指的NF．KB為P50／P65異源二聚體，調(diào)控下游一系列抗凋亡基因的表達(dá)。抑制P65的活性可抑制由NF．KB所啟動(dòng)的基因轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制，最終誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。已有研究發(fā)現(xiàn)DS／Cu可普遍抑制NF．KB的表達(dá)水平，從而誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。另外，
6、有研究報(bào)道ROS可抑制NF．KB的激活。因此，ROS抑制NF．KB的活化可能增強(qiáng)JNK活化的促凋亡作用。Nrf2是細(xì)胞調(diào)節(jié)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子，生理狀態(tài)下Nr[2與胞質(zhì)蛋白伴侶分子keapl結(jié)合使活性處于相對(duì)抑制狀態(tài)，氧化應(yīng)激作用下導(dǎo)致Nrf2與Keapl解耦聯(lián)，活化Nrf2轉(zhuǎn)移入核內(nèi)，調(diào)控其下游第1I相解毒酶、抗氧化酶Ⅱ碩士學(xué)位論文及某些藥物轉(zhuǎn)運(yùn)泵等靶基因的表達(dá)，保護(hù)基因免受損傷，與腫瘤耐藥密切相關(guān)。而研究發(fā)現(xiàn)高水平的ROS可破壞具有抗氧化作用的轉(zhuǎn)錄因子Nrf2活性，因而進(jìn)一步增強(qiáng)ROS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。促進(jìn)ROS生成及抑制Nrf2活性有望成
7、為抗腫瘤治療的有效方法之一。本研究以Raji細(xì)胞及雌性、四周齡BALB／C裸鼠為研究對(duì)象，研究DS及DS／Cu對(duì)Raji細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響及其與ROS／Nrf2、JNK及NF．1出通路的關(guān)系；同時(shí)進(jìn)一步觀察DS及DS／Cu對(duì)Raji細(xì)胞BALB／C裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響，為將來(lái)臨床應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。目的本課題以Burkitt’S淋巴瘤細(xì)胞株Raji細(xì)胞和BALB／C裸鼠為研究對(duì)象，探討DS／Cu能否在體外誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡并抑制其增殖，明確DS／Cu對(duì)Burkitt’S淋巴瘤裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響。進(jìn)一步從ROS／Nrf2、JNK、以及NF．r
8、,B通路探討其潛在的分子機(jī)制。方法l、細(xì)胞株：人B細(xì)胞淋巴瘤(Burkitt’s)細(xì)胞株Raji。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)
