大鼠觸液核p2x3受體的表達(dá)及其在骨癌痛條件下的變化

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1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文大鼠觸液核P2X3受體的表達(dá)及其在骨癌痛條件下的變化姓名：鄭翠娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：張勵才2012-04徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文———’?！灰灰淮笫笥|液核P2X3受體的表達(dá)及其在骨癌痛條件下的變化中文摘要目的觀察大鼠觸液核P2X3受體的表達(dá)以及在骨癌痛慢性過程中的變化情冽，探討觸液核的功能及其在骨癌痛過程中的作用機(jī)制，為減輕臨床骨癌疼痛提供甸‘能的新的依據(jù)。方法SD雌性大鼠(1609

2、．1809)1．正常大鼠處死前48小時側(cè)腦室引入霍亂毒素B亞單位與辣根過氧化物酶復(fù)厶物(choleratoxinBconjugatedtohorseradishperoxidase，CB．HRP)定位觸液核神經(jīng)元，取觸液核所在段腦組織，冰凍切片，做P2X3單標(biāo)及cB．HRP／P2X3雙械免疫熒光反應(yīng)，用免疫熒光化學(xué)雙重標(biāo)記技術(shù)與激光共聚焦顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，!觀察正常大鼠觸液核中是否有P2X3受體的表達(dá)。2．隨機(jī)分為二組：’脛骨癌痛組(BCP)、假手術(shù)組(S)。制作模型，BCP組脛骨平臺處注射Walker256乳腺癌細(xì)胞，s組注射等體積的生理鹽水。

3、用電子測痛儀測定兩組大鼠術(shù)前和術(shù)后第1、5、7、14和21天機(jī)械縮足閾值(mechanicalwithdrawalthreshold，MWT)；X線照射觀察手術(shù)后第7、14、21天骨質(zhì)有無破壞友其破壞程度。以上用來證明模型的可靠性。3．復(fù)制(1)中的熒光方法，觀察骨癌痛和假手術(shù)組術(shù)后第1、5、7、14、21天大鼠觸液核上P2X3受體的表達(dá)變化。Image．ProPlus6．0圖像用于計數(shù)兩組大鼠各時間點(diǎn)的CB．HRP陽性、P2X3陽性和CB．HRP／P2X3雙標(biāo)陽性神經(jīng)元細(xì)胞。結(jié)果1．『F常大鼠觸液核有P2X3受體表達(dá)。2．術(shù)前MWT值骨癌組的5

4、2．77+2．67和假手術(shù)組的51．08±5．62，無明顯差異(P>O．05)；第5天骨癌組的MWT為45．91_+2．66，閩值小于假手術(shù)組的52．11±4．04徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文和術(shù)日訂基礎(chǔ)值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)；第7天骨癌組閾值為31．84+3．15，明顯低于假手術(shù)組的50．41±2．26和術(shù)前基礎(chǔ)值(P

5、，第14天記為2，第21天記為3。3．手術(shù)后第1天骨癌痛組CB．HRP／P2X3增加為252+26，與假手術(shù)組209+_25相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)；第5天骨癌組雙標(biāo)數(shù)量增加到313+_21，假手術(shù)組為205+-23，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

6、越嚴(yán)重，閾值越來越低到第21天達(dá)到最低值；X線提示骨質(zhì)破壞隨時間越來越強(qiáng)，與機(jī)械痛敏相一致。根據(jù)以往研究表明骨癌痛模型科學(xué)，可靠。3．骨癌痛后第1天觸液核上P2X3受體就開始增加并且與術(shù)前值和假手術(shù)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，并隨時間一直持續(xù)到第21天達(dá)到高峰，結(jié)合MWT和X線結(jié)果提示觸液核P2X3受體不僅參與了骨癌的發(fā)生和同時參與了骨癌的維持過程。這為臨床骨癌痛包括各種骨癌轉(zhuǎn)移痛病人減輕臨床癥狀提供了新的依據(jù)。關(guān)鍵詞觸液核；觸液核神經(jīng)元；P2X3；骨癌痛；疼痛本課題受2009年國家自然科學(xué)基金資助(基金號：30871307)徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Ex

7、pressionofP2X3receptorinthecerebrospinalfluid-contactingnucleusofratsanditschangesinbonecancerpareAbstractCSF—CN48hbeforekillingit．GetbraintissueofCSF·CNinthefrozensection，andthenmadeP2X3receptorsinglelabeledandCB-HRP／P2X3doublelabeled．：Adouble—labeledimmunofluorescenttechniq

8、ueandlaserscanningconfocalmicroscopywereusedtoidentifytheexpressiono