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《notch通路在tgf-β1誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專(zhuān)利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。研究生簽名：牟朝陽(yáng)導(dǎo)師簽章：l鰳二級(jí)學(xué)院領(lǐng)／習(xí)J諢專(zhuān)月≥?研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，
2、文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，指導(dǎo)老師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫(xiě)，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：，神陽(yáng)導(dǎo)師簽章：、I娩嗎／塒’年尋月節(jié)日目錄燃煳中文摘要?????????????????????????：?··1中文摘要Notch通路在TGF-131誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用摘要目的：上皮性卵巢癌為最常見(jiàn)的卵巢惡性腫瘤，其死亡率居?jì)D科惡性腫瘤首位。卵巢癌早期不易發(fā)現(xiàn)，一旦出現(xiàn)癥狀多屬晚期(IIHV期)，存在廣泛轉(zhuǎn)移。雖經(jīng)過(guò)規(guī)范化治療包括理想的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和以鉑類(lèi)和／或紫杉醇為基礎(chǔ)的聯(lián)合化
3、療，上皮性卵巢癌的5年生存率仍徘徊在30％．40％。卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生和對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是造成其高死亡率的兩個(gè)關(guān)鍵因素。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial．mesenchymaltransition，EMT)是一個(gè)高度保守的細(xì)胞程序，是指上皮細(xì)胞失去上皮特性獲得間質(zhì)細(xì)胞表型的一種生物學(xué)現(xiàn)象。它不僅是哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育和器官形成的基礎(chǔ)過(guò)程，還是腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。并且越來(lái)越多的研究表明，腫瘤細(xì)胞經(jīng)過(guò)EMT，可以獲得多向分化等干細(xì)胞樣特性，與腫瘤對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥相關(guān)。因此通過(guò)各種技術(shù)和策略干擾腫瘤細(xì)胞的E
4、MT過(guò)程有望為癌癥治療提供一個(gè)新途徑，但這有賴于對(duì)EMT分子調(diào)控機(jī)制以及腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子B(transforminggrowthfactor-13，TGF．B)是一種分泌型的多肽信號(hào)分子，在多種腫瘤組織中呈高表達(dá)，其作為EMT的一個(gè)重要誘導(dǎo)因子，以自分泌和旁分泌的形式作用于腫瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)和維持細(xì)胞的EMT。研究發(fā)現(xiàn)，在誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生完全EMT轉(zhuǎn)換過(guò)程中，TGF．13需要干細(xì)胞信號(hào)通路如Notch，W州13．catemn，Ras，Hedgehog等的介導(dǎo)，這種現(xiàn)象的存在進(jìn)一步提示了EMT與腫瘤干細(xì)胞
5、之間的某種關(guān)聯(lián)性。但信號(hào)通路之間的串話具有環(huán)境依賴性，該現(xiàn)象在上皮性卵巢癌中的存在性和存在形式仍需要進(jìn)一步研究的證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞株SKOV3，以TGF．131和Notch信號(hào)通路抑制劑DAPT作為處理因素，旨在研究Notch信號(hào)通路在TGF．B1誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞發(fā)生EMT過(guò)程中的作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探索，以期為上皮性卵巢癌的治療提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依中文摘要據(jù)。方法：常規(guī)培養(yǎng)人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞株SKOV3，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)基同步化24h后，按加入刺激的不同分為空
6、白對(duì)照組，TGF．B1組(iong／m1)，DAPT組(Notch信號(hào)通路的抑制劑，10uM)，TGF．131和DAPT聯(lián)合處理組(10ng／mlTGF．131，10uMDAPT)，不同刺激均作用72h。1倒置顯微鏡：應(yīng)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。2蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)：應(yīng)用Westemblotting檢測(cè)上皮細(xì)胞標(biāo)記物E．cadherin，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物N—cadherin、Vimentin，Notch信號(hào)通路的激活形式NICD以及Notch信號(hào)通路的配體Jaggedl的表達(dá)情況。3細(xì)胞劃痕
7、試驗(yàn)：應(yīng)用劃痕試驗(yàn)評(píng)估細(xì)胞的遷移能力，常規(guī)培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞，應(yīng)用無(wú)血清培養(yǎng)基同步24h后，先按照分組加入不同刺激作用48h后再做劃痕，劃痕時(shí)理想的細(xì)胞密度為形成細(xì)胞單層，觀察劃痕24h后不同組間劃痕愈合情況的不同。4實(shí)時(shí)熒光定量PCR：待加入TGF．B1刺激48h和72h后提取細(xì)胞的總RNA，檢測(cè)JaggedlmRNA的表達(dá)量。5應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果：1倒置相差顯微鏡下觀察正常培養(yǎng)的SKOV3細(xì)胞形態(tài)為典型的鋪路石樣，細(xì)胞排列規(guī)則緊湊，在TGF．13l作用72h后，細(xì)胞轉(zhuǎn)換成紡錘體形，形成明顯
8、的細(xì)胞偽足，且細(xì)胞排列變松散；在DAPT處理組、TGF．131和DAPT聯(lián)合處理組，細(xì)胞形態(tài)均沒(méi)有明顯變化。2Westernblotting結(jié)果：(1)經(jīng)10ng／ml的TGF—B1作用72h后，SKOV3細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)記物E．cadherin(0．632-q：0．129)表達(dá)較對(duì)照組(1．000±0．000)明顯降
