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《notch通路在tgf-β1誘導上皮性卵巢癌細胞發(fā)生上皮間質轉化中的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本學位論文在導師(或指導小組)的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲的研究成果，其知識產權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文相關的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數據、申報的專利等知識產權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應的法律責任。研究生簽名：牟朝陽導師簽章：l鰳二級學院領／習J諢專月≥?研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內容外，
2、文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果，指導老師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名：，神陽導師簽章：、I娩嗎／塒’年尋月節(jié)日目錄燃煳中文摘要?????????????????????????：?··1中文摘要Notch通路在TGF-131誘導上皮性卵巢癌細胞發(fā)生上皮間質轉化中的作用摘要目的：上皮性卵巢癌為最常見的卵巢惡性腫瘤，其死亡率居婦科惡性腫瘤首位。卵巢癌早期不易發(fā)現，一旦出現癥狀多屬晚期(IIHV期)，存在廣泛轉移。雖經過規(guī)范化治療包括理想的腫瘤細胞減滅術和以鉑類和／或紫杉醇為基礎的聯合化
3、療，上皮性卵巢癌的5年生存率仍徘徊在30％．40％。卵巢癌侵襲轉移的發(fā)生和對化療藥物產生耐藥性是造成其高死亡率的兩個關鍵因素。上皮間質轉化(epithelial．mesenchymaltransition，EMT)是一個高度保守的細胞程序，是指上皮細胞失去上皮特性獲得間質細胞表型的一種生物學現象。它不僅是哺乳動物胚胎發(fā)育和器官形成的基礎過程，還是腫瘤發(fā)生侵襲轉移過程中的關鍵環(huán)節(jié)。并且越來越多的研究表明，腫瘤細胞經過EMT，可以獲得多向分化等干細胞樣特性，與腫瘤對化療藥物產生耐藥相關。因此通過各種技術和策略干擾腫瘤細胞的E
4、MT過程有望為癌癥治療提供一個新途徑，但這有賴于對EMT分子調控機制以及腫瘤發(fā)生發(fā)展機制的進一步認識。轉化生長因子B(transforminggrowthfactor-13，TGF．B)是一種分泌型的多肽信號分子，在多種腫瘤組織中呈高表達，其作為EMT的一個重要誘導因子，以自分泌和旁分泌的形式作用于腫瘤細胞，誘導和維持細胞的EMT。研究發(fā)現，在誘導細胞發(fā)生完全EMT轉換過程中，TGF．13需要干細胞信號通路如Notch，W州13．catemn，Ras，Hedgehog等的介導，這種現象的存在進一步提示了EMT與腫瘤干細胞
5、之間的某種關聯性。但信號通路之間的串話具有環(huán)境依賴性，該現象在上皮性卵巢癌中的存在性和存在形式仍需要進一步研究的證實。本實驗通過體外培養(yǎng)人卵巢漿液性囊腺癌細胞株SKOV3，以TGF．131和Notch信號通路抑制劑DAPT作為處理因素，旨在研究Notch信號通路在TGF．B1誘導上皮性卵巢癌細胞發(fā)生EMT過程中的作用，并對其作用機制進行探索，以期為上皮性卵巢癌的治療提供新的思路和實驗依中文摘要據。方法：常規(guī)培養(yǎng)人卵巢漿液性囊腺癌細胞株SKOV3，待細胞進入對數生長期，應用無血清培養(yǎng)基同步化24h后，按加入刺激的不同分為空
6、白對照組，TGF．B1組(iong／m1)，DAPT組(Notch信號通路的抑制劑，10uM)，TGF．131和DAPT聯合處理組(10ng／mlTGF．131，10uMDAPT)，不同刺激均作用72h。1倒置顯微鏡：應用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)的變化。2蛋白質印跡(Westernblotting)：應用Westemblotting檢測上皮細胞標記物E．cadherin，間質細胞標記物N—cadherin、Vimentin，Notch信號通路的激活形式NICD以及Notch信號通路的配體Jaggedl的表達情況。3細胞劃痕
7、試驗：應用劃痕試驗評估細胞的遷移能力，常規(guī)培養(yǎng)SKOV3細胞，應用無血清培養(yǎng)基同步24h后，先按照分組加入不同刺激作用48h后再做劃痕，劃痕時理想的細胞密度為形成細胞單層，觀察劃痕24h后不同組間劃痕愈合情況的不同。4實時熒光定量PCR：待加入TGF．B1刺激48h和72h后提取細胞的總RNA，檢測JaggedlmRNA的表達量。5應用SPSS13．0統(tǒng)計軟件進行數據分析。結果：1倒置相差顯微鏡下觀察正常培養(yǎng)的SKOV3細胞形態(tài)為典型的鋪路石樣，細胞排列規(guī)則緊湊，在TGF．13l作用72h后，細胞轉換成紡錘體形，形成明顯
8、的細胞偽足，且細胞排列變松散；在DAPT處理組、TGF．131和DAPT聯合處理組，細胞形態(tài)均沒有明顯變化。2Westernblotting結果：(1)經10ng／ml的TGF—B1作用72h后，SKOV3細胞上皮細胞標記物E．cadherin(0．632-q：0．129)表達較對照組(1．000±0．000)明顯降
