Notch信號通路在TGF-β1誘導的胃癌細胞EMT中的作用

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1、學校代碼１０４５９學號或申請?zhí)枺玻埃保担保玻矗叮矗埃担担崳姡Ｃ芗夐_＾ｆｋ碩士學位論文Ｎｏｔｃｈ信號通路在ＴＧＦ－β１誘導的（胃癌細胞ＥＭＴ中的作用作者姓名：張巍然導師姓名：何燕霞副教授學科門類：醫(yī)學專業(yè)名稱：臨床檢驗診斷學培養(yǎng)院系：第三臨床學院完成時間：２０１８年５月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheroleofNotchsignalingpathwayinEMTinduc

2、edbyTGF-β1ingastriccancercellsByWeiranZhangSupervisor:AssociateProf.YanxiaHeClinicalLaboratoryDiagnosticsTheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2018Notch信號通路在TGF-β1誘導的胃癌細胞EMT中的作用碩士研究生：張巍然導師：何燕霞副教授專業(yè)：臨床檢驗診斷學鄭州大學第三臨床學院河南鄭州450052摘要胃癌是最常見的惡性腫瘤，盡管它在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率呈下降趨

3、勢，但其死亡率仍高居不下。臨床運用了大量常規(guī)與靶向治療，但多數(shù)胃癌病人被確診時已出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移。因此，探究與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關的重要信號通路及傳導機制，將有利于胃癌的早期診斷及靶向治療。Notch信號通路在遺傳進化上十分保守，在細胞分化增殖、凋亡和干細胞的自我更新等方面發(fā)揮了重要作用。研究顯示，它與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、復發(fā)、低生存率及不良預后等密切相關。近年來，大量研究證實它在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）過程中也發(fā)揮了重要作用。Notch信號通路在相鄰細胞間發(fā)揮作用，不需要第二信

4、使的參與。當Notch受體與鄰近細胞膜上配體Jagged1結(jié)合而被激活后，釋放Notch受體的胞內(nèi)區(qū)域(Notchintracellulardomain,NICD)，后者繼而轉(zhuǎn)位于細胞核中，與轉(zhuǎn)錄復合體相互作用，激活Notch通路的下游靶基因。EMT是上皮來源的惡性腫瘤表達惡性行為的重要方式，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用。其特征為：上皮細胞間連接被破壞，失去細胞極性，上皮細胞表型轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細胞表型。除此之外，EMT過程最重要的改變是，它使腫瘤細胞獲得更強的運動能力。上皮性標志基因E-cadherin的缺失是EMT事件的標志性變化，

5、間質(zhì)性標志基因有Vimentin、N-cadherin等，可通過檢測這些標記基因的表達水平來驗證EMT的發(fā)生。研究表明，在腫瘤微環(huán)境中轉(zhuǎn)化生長因子β1I（transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1）可以刺激血管生成、促進細胞外基質(zhì)沉積并增加蛋白水解酶的合成。TGF-β1在細胞分化、增殖、凋亡及運動能力等方面發(fā)揮重要作用。它在各種病理條件下大量表達，如慢性炎癥和腫瘤。多方研究證實，腫瘤微環(huán)境的改變?nèi)缛毖趸騎GF-β1增高，可以誘發(fā)多種類型的上皮細胞發(fā)生EMT。目前，Notch信號在胃癌上皮間質(zhì)中的作用尚未闡明

6、，探討其中的作用機制，或?qū)⒂幸嬗谖赴┑脑\療。目的采用熒光定量PCR實驗（Realtime-PCR）、免疫印跡實驗（WesternBlot）和Transwell侵襲實驗檢測在空白對照組、誘導組、陰性轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染組中Jagged1、N1ICD、E-cadherin和Vimentin等基因的表達量，以及處理前后細胞侵襲性的變化，初步探討Notch信號通路在TGF-β1誘導的胃癌EMT中的作用及其對細胞侵襲性的影響。材料和方法1研究對象選擇胃癌細胞株SGC7901，使用RPMI1640和FBS按9:1配置的完全培養(yǎng)基，將細胞置于37℃、5%

7、CO2的恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。2方法待細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶底約80%時，將其隨機分為四組，即空白對照組、誘導組、陰性對照組、轉(zhuǎn)染組。其中，空白對照組不做任何處理，誘導組采用濃度為10ng/ml的TGF-β1誘導胃癌細胞24h，轉(zhuǎn)染組瞬時轉(zhuǎn)染Jagged1的siRNA，陰性對照組轉(zhuǎn)染無義siRNA序列，轉(zhuǎn)染組和陰性對照組轉(zhuǎn)染48h后再用10ng/ml的TGF-β1誘導細胞24h。采用RealtimePCR實驗檢測各組中E-cadherin、IIVimentin及Jagged1mRNA的表達水平，用WesternBlot實驗檢測各組中E-

8、cadherin、Vimentin、Jagged1及N1ICD蛋白的表達水平。Transwell侵襲實驗用于檢測各組中細胞侵襲能力的變化。3統(tǒng)計學分析應用SPSS21.0軟件進行數(shù)據(jù)處理及分析，用?x±s表述定量資料數(shù)據(jù)，兩組間比較采