Notch信號(hào)通路在TGF-β1誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞EMT中的作用

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1、學(xué)校代碼１０４５９學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)枺玻埃保担保玻矗叮矗埃担担崳姡Ｃ芗?jí)開(kāi)＾ｆｋ碩士學(xué)位論文Ｎｏｔｃｈ信號(hào)通路在ＴＧＦ－β１誘導(dǎo)的（胃癌細(xì)胞ＥＭＴ中的作用作者姓名：張巍然導(dǎo)師姓名：何燕霞副教授學(xué)科門(mén)類(lèi)：醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)培養(yǎng)院系：第三臨床學(xué)院完成時(shí)間：２０１８年５月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheroleofNotchsignalingpathwayinEMTinduc

2、edbyTGF-β1ingastriccancercellsByWeiranZhangSupervisor:AssociateProf.YanxiaHeClinicalLaboratoryDiagnosticsTheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2018Notch信號(hào)通路在TGF-β1誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞EMT中的作用碩士研究生：張巍然導(dǎo)師：何燕霞副教授專(zhuān)業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)鄭州大學(xué)第三臨床學(xué)院河南鄭州450052摘要胃癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤，盡管它在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率呈下降趨

3、勢(shì)，但其死亡率仍高居不下。臨床運(yùn)用了大量常規(guī)與靶向治療，但多數(shù)胃癌病人被確診時(shí)已出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移。因此，探究與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的重要信號(hào)通路及傳導(dǎo)機(jī)制，將有利于胃癌的早期診斷及靶向治療。Notch信號(hào)通路在遺傳進(jìn)化上十分保守，在細(xì)胞分化增殖、凋亡和干細(xì)胞的自我更新等方面發(fā)揮了重要作用。研究顯示，它與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、低生存率及不良預(yù)后等密切相關(guān)。近年來(lái)，大量研究證實(shí)它在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT）過(guò)程中也發(fā)揮了重要作用。Notch信號(hào)通路在相鄰細(xì)胞間發(fā)揮作用，不需要第二信

4、使的參與。當(dāng)Notch受體與鄰近細(xì)胞膜上配體Jagged1結(jié)合而被激活后，釋放Notch受體的胞內(nèi)區(qū)域(Notchintracellulardomain,NICD)，后者繼而轉(zhuǎn)位于細(xì)胞核中，與轉(zhuǎn)錄復(fù)合體相互作用，激活Notch通路的下游靶基因。EMT是上皮來(lái)源的惡性腫瘤表達(dá)惡性行為的重要方式，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮重要作用。其特征為：上皮細(xì)胞間連接被破壞，失去細(xì)胞極性，上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化為間質(zhì)細(xì)胞表型。除此之外，EMT過(guò)程最重要的改變是，它使腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)能力。上皮性標(biāo)志基因E-cadherin的缺失是EMT事件的標(biāo)志性變化，

5、間質(zhì)性標(biāo)志基因有Vimentin、N-cadherin等，可通過(guò)檢測(cè)這些標(biāo)記基因的表達(dá)水平來(lái)驗(yàn)證EMT的發(fā)生。研究表明，在腫瘤微環(huán)境中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1I（transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1）可以刺激血管生成、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)沉積并增加蛋白水解酶的合成。TGF-β1在細(xì)胞分化、增殖、凋亡及運(yùn)動(dòng)能力等方面發(fā)揮重要作用。它在各種病理?xiàng)l件下大量表達(dá)，如慢性炎癥和腫瘤。多方研究證實(shí)，腫瘤微環(huán)境的改變?nèi)缛毖趸騎GF-β1增高，可以誘發(fā)多種類(lèi)型的上皮細(xì)胞發(fā)生EMT。目前，Notch信號(hào)在胃癌上皮間質(zhì)中的作用尚未闡明

6、，探討其中的作用機(jī)制，或?qū)⒂幸嬗谖赴┑脑\療。目的采用熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)（Realtime-PCR）、免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WesternBlot）和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在空白對(duì)照組、誘導(dǎo)組、陰性轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染組中Jagged1、N1ICD、E-cadherin和Vimentin等基因的表達(dá)量，以及處理前后細(xì)胞侵襲性的變化，初步探討Notch信號(hào)通路在TGF-β1誘導(dǎo)的胃癌EMT中的作用及其對(duì)細(xì)胞侵襲性的影響。材料和方法1研究對(duì)象選擇胃癌細(xì)胞株SGC7901，使用RPMI1640和FBS按9:1配置的完全培養(yǎng)基，將細(xì)胞置于37℃、5%

7、CO2的恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。2方法待細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶底約80%時(shí)，將其隨機(jī)分為四組，即空白對(duì)照組、誘導(dǎo)組、陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染組。其中，空白對(duì)照組不做任何處理，誘導(dǎo)組采用濃度為10ng/ml的TGF-β1誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞24h，轉(zhuǎn)染組瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Jagged1的siRNA，陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染無(wú)義siRNA序列，轉(zhuǎn)染組和陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染48h后再用10ng/ml的TGF-β1誘導(dǎo)細(xì)胞24h。采用RealtimePCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組中E-cadherin、IIVimentin及Jagged1mRNA的表達(dá)水平，用WesternBlot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組中E-

8、cadherin、Vimentin、Jagged1及N1ICD蛋白的表達(dá)水平。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)各組中細(xì)胞侵襲能力的變化。3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及分析，用?x±s表述定量資料數(shù)據(jù)，兩組間比較采