lasp-1在hbx促肝癌細(xì)胞增殖和遷移中作用地研究

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1、?11111]1IIIIIt1111111Y1885083l材料??????????????????????????????????????”302方法??????????????????????????????????????”30結(jié)果????????????????????????????????????????33討論????????????????????????????????????????36附錄????????????????????????????????????????39·結(jié)論????????????????????????????

2、????????????41論文圖片?????????????????????????????42參考文獻(xiàn)????????????????????????????”49綜述????????????????????????????????????????54攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文???????????????????·67致{射????????????????????????????????????????68論文獨(dú)創(chuàng)性聲明???????????????????????????69論文使用授權(quán)聲明??????????????????????????

3、69論文審閱認(rèn)定書???????????????????????????·70徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文縮略詞cDNACCK．8DAPIDMSOEBHBVHBXHCCHepG2HRP英文全稱縮略詞表Abbreviations中文全稱complementdeoxyribonucleicacid互補(bǔ)脫氧核糖核酸CellCountingKit一8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒4’，6-diamidino·2一phenylindole4。，6-二脒基-2-苯基吲哚Dimethylsulfoxide二甲基亞砜Ethidiumbromide溴化乙錠HepatitisBvirusHe

4、patitisBvirusXgene乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒X基因Hepatocellularcarcinoma肝細(xì)胞癌Humanhepatocellularlivercarcinoma人肝癌細(xì)胞株celllineLASP-·1LIMandSH3domainprotein··1mI礬APBSPMSFIU’-PCRRNaseARNasinsiRNAmessengerRNA辣根過氧化物酶信使核糖核酸Phosphate-bufferedsaline磷酸鹽緩沖液Phenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟ReverseTranscrip

5、tion·PolymeraseChain逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)ReactionRibonucleaseARibonucleaseinhibitor核糖核酸酶A核糖核酸酶抑制劑小干擾RNA徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文SDS．PAGESodiumdodecylsulfatepolya—crylamide十二烷基硫酸鈉一聚丙烯嘶tonX．100gelelectrophoresis2酰胺凝膠電泳曲拉通X．100徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文LASP．1在HBX促肝癌細(xì)胞增殖和遷移中作用的研究中文摘要目的探討乙肝病毒X蛋白能否通過上調(diào)LASP-1及其蛋白表達(dá)從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和

6、遷移。方法(1)應(yīng)用脂質(zhì)體法將pcDNA3．1，pcDNA3．1-X分別轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞。經(jīng)G418篩選，克隆，建立陰性對(duì)照的細(xì)胞模型HepG2．Mock和穩(wěn)定表達(dá)HBX的細(xì)胞模型HepG2．HBX。通過RT-PCR、Westernblot方法對(duì)細(xì)胞模型中HBXmRNA及蛋白進(jìn)行檢測(cè)，分析細(xì)胞模型中HBX的表達(dá)情況。(2)采用RT-PCR、Westernblot檢測(cè)HepG2-Mock和HepG2-HBX細(xì)胞中的LASP-l基因及蛋白的表達(dá)情況；采用免疫熒光檢測(cè)LASP-l蛋白在HepG2一Mock，HepG2一HBX細(xì)胞內(nèi)的分布；采用Westembl

7、ot檢測(cè)PI．3K信號(hào)通路中的p-Akt蛋白的表達(dá)情況，運(yùn)用阻斷劑LY294002阻斷PI．3K信號(hào)通路的激活，檢測(cè)LASP．1蛋白的表達(dá)，明確PI．3K信號(hào)通路的激活在HBX促進(jìn)LASP．1表達(dá)的作用。(3)構(gòu)建LASP．1的siRNA表達(dá)質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染HepG2．HBX細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48h后，運(yùn)用Westernblot檢測(cè)LASP．1蛋白的表達(dá)情況，明確siRNA對(duì)LASP—l蛋白的抑制效果。采用CCK．8實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HepG2-Mock，HepG2一HBX細(xì)胞的增殖情況，Transwell和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)方法觀察HepG2一Mock，HepG

8、2一HBX細(xì)胞的遷移能力，明確HBx能否促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，及LASP．1