川貝母2015年藥典

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1、川貝母ChuanbeimuFRITILLARIAECIRRHOSAEBULBUS本品為百合科植物川貝母FritiLlariacirrhosaD.Don、暗紫貝母FritiLlariaunibracteataHsiaoetK.C.Hsia、廿肅貝母Frit訂lariaprzewal3,kiiMaxim,>梭砂貝母FritiLlariadelavayiFranch.>太白貝母FritillariataipaicnsisP.Y.Li或瓦布貝母Frit訂lariaunibracteataHsiaoetK.C?Hsiavar.wabuensis(

2、SY.TangetSC.Yue)Z.D.Liu,S.WangetS.C.Chen的干燥鱗莖。按性狀不同分別習(xí)稱“松貝”、“青貝”、“爐貝”和“栽培品”。夏、秋二季或積雪融化后采挖，除去須根、粗皮及泥沙，曬干或低溫干燥?！拘誀睢克韶惓暑悎A錐形或近球形，高0.3?0.8cm,直徑0.3?0.9cm0表面類白色。外層鱗葉2瓣，大小懸殊，大瓣緊抱小瓣，未抱部分呈新月形，習(xí)稱“懷中抱月”；頂部閉合，內(nèi)有類圓柱形、頂端稍尖的心芽和小鱗葉1?2枚；先端鈍圓或稍尖，底部平.微凹人，中心有1灰褐色的鱗莖盤，偶有殘存須根。質(zhì)硬而脆，斷面白色，富粉性。氣微，

3、味微苫。青貝呈類扁球形,高0.4?1.4cm,直徑0.4?l?6cm。外層鱗葉2瓣，大小相近,相對抱合，頂部開裂，內(nèi)有心芽和小鱗葉2?3枚及細(xì)圓柱形的殘莖。爐貝呈長圓錐形，高0.7?2.5cm,直徑0.5?2.5cm。表而類白色或淺棕黃色，有的貝棕色斑點(diǎn)。外層鱗葉2瓣，大小相近，頂部開裂而略尖，基部稍尖或較鈍。栽培品呈類扁球形或短圓柱形，高0.5?2cm,直徑1?2.5cm。表面類白色或淺棕黃色?稍粗糙，有的具淺黃色斑點(diǎn)。外層鱗葉2瓣，大小相近，頂部多開裂而較平。【鑒別】(1)本品粉末類白色或淺黃色。松貝、青貝及栽培品淀粉粒其多，廣卵形

4、、長圓形或不規(guī)則圓形，有的邊緣不平整或略作分枝狀，直徑5?64um,臍點(diǎn)短縫狀、點(diǎn)狀、人字狀或馬蹄狀，層紋隱約可見。表皮細(xì)胞類長方形，垂周壁微波狀彎曲，偶見不定式氣孔，圓形或扁圓形。螺紋導(dǎo)管直徑5?26mmo爐貝淀粉粒廣卵形、貝殼形、腎形或橢圓形，直徑約至60um,臍點(diǎn)人字狀、星狀或點(diǎn)狀，層紋明顯。螺紋導(dǎo)管和網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑可達(dá)64umo(2)取本品粉末10g,加濃氨試液10ml,密塞，浸泡1小時，加二氯甲烷40ml,超聲處理1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5皿使溶解，作為供試品溶液。另取貝母索乙對照品，加甲醇制成每1ml各含lmg的

5、溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗.吸取供試品溶液1?6卩川1、對照品溶液各2U1,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液-水（1&2：1：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，依次噴以稀碘化祕鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。（3）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶長度多態(tài)性方法。模板DNA提取取本品0.lg,依次用75%乙醉lnil、滅菌超純水1ml淸洗，吸干表面水分,置乳缽中研磨成極細(xì)粉。取20mg,置1.5ml離心管中,用新型廣譜植物基因組DNA快速

6、提取試劑盒提取DNA［加人緩沖液AP1400u1和RNA卿溶液（10mg/ml）4］i1,渦漩振蕩，65°C水浴加熱10分鐘，加入緩沖液AP2130U1,充分混勻，冰浴冷卻5分鐘，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘14000轉(zhuǎn)）10分鐘；吸取上淸液轉(zhuǎn)移入另一離心管屮，加人1?5倍體積的緩沖液AP3/E,混勻，加到吸附柱上，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘13000轉(zhuǎn)）1分鐘，棄去過濾液，加入漂洗液700u1,離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn)）30秒，棄去過濾液；再加入漂洗液500u1,離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn)）30秒，棄去過濾液;再離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘13000轉(zhuǎn)

7、）2分鐘，取出吸附柱，放入另一離心管中，加入50y1洗脫緩沖液，室溫放置3?5分鐘，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn)）1分鐘，將洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，離心（轉(zhuǎn)速為每分釗?12000轉(zhuǎn)）1分鐘］，取洗脫液，作為供試品溶液,置4°C冰箱中備用。另取川貝母對照藥材O.lg,同法制成對照紗材模板DNA溶液。PCR-RFLP反應(yīng)鑒別引物：5'CGTAACAAGGTTT-CCGTAGGTGAA3'和5'GCTACGTTCTTCATCGAT3'。PCR反應(yīng)體系：在200u1離心管中進(jìn)行，反應(yīng)總體積為30m1,反應(yīng)體系包括10XPCR緩沖

8、液3卩1,二氯化鎂（25mmol/L）2.4u1,dNTP（10mmol/L）0.6Pl,鑒別引物（30UU1O1/L）各0.5u1,高保真TaqDAN聚合酶（5U/u1）0.2u1,模板1u1,無菌超純水