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《戊型肝炎病毒基因4型在plcprf5細(xì)胞中的培養(yǎng)及其特征研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)學(xué)校代碼：10023博士學(xué)位論文戊型肝炎病毒基因4型在PLC／PRF／5細(xì)胞中的培養(yǎng)及其特征研究所院：姓名：指導(dǎo)教師：學(xué)科專(zhuān)業(yè)：研究方向：完成日期：中國(guó)食品藥品檢定研究院張峰王佑春教授病原生物學(xué)HEV的分子生物學(xué)研究2014年9月萬(wàn)方數(shù)據(jù)目錄中文摘要?????????????????????????????????????1Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．，．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
2、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3前言??????????????????????????????????????5材料和試劑?????1．材料?????1．1恒河猴糞便1．2細(xì)胞???2．試劑????????????????????????????????????．16方法?????????????????????????????????????????????????。191．毒種的制備?????????????????????????????????192．細(xì)胞培養(yǎng)??????????????????????????????????．193．
3、HEV接種(細(xì)胞株篩選階段)?????????????????????????194．HEV接種PLC／PRF／5細(xì)胞???????????????????????????205．含HEV培養(yǎng)上清濃縮和粗純?????????????????????????．．206．病毒的pH3．0／pHI1．0處理???????????????????????????217．病毒的熱滅活處理??????????????????????????????r218．病毒脫脂處理????????????????????????????????．219．含病毒上清電鏡觀察用銅網(wǎng)的制備?????????
4、??????????????2l10．含病毒細(xì)胞電鏡觀察用樣品的制備???????????????????????2111．細(xì)胞免疫熒光染色??????????????????????????????．．2212．pORF2抗原檢測(cè)???????????????????????????????．2313．抗HEV全抗體檢測(cè)??????????????????????????????2314．抗HEVlgG抗體檢測(cè)?????????????????????????????2315．抗HEVIgM抗體檢測(cè)?????????????????????????????2316．中和試驗(yàn)?
5、?????????????????????????????????．．23l7．Trizol溶解細(xì)胞和細(xì)胞總RNA提取???????????????????????2418．培養(yǎng)上清中病毒RNA提取???????????????????????????2519．RealtimeRT-PCR檢測(cè)HEVRNA????????????????????????????????．2520．基因芯片檢測(cè)：由博奧生物有限公司檢測(cè)，簡(jiǎn)要描述如下：????????????．2621．反轉(zhuǎn)錄合成細(xì)胞總cDNA???????????????????????????．．2622．基因芯片驗(yàn)證Realt
6、imePCR??????????????????????????一27結(jié)果?????????????????????????????????????．29第一部分：HEV體外細(xì)胞培養(yǎng)的建立及培養(yǎng)條件優(yōu)化???????????????29M萬(wàn)方數(shù)據(jù)1．HEV毒種制備及HEVRNA的RealtimeRT-PCR定量檢測(cè)?????????????302．候選細(xì)胞株的篩選??????????????????????????????．3l2．1候選細(xì)胞株的選擇????????????????????????????，．3l2．2．接種量確定????????????????????????
7、???????．312．3．篩選結(jié)果????????????????????????????????．313．培養(yǎng)基的優(yōu)化????????????????????????????????．323．1．背景?????????????????????????????????．323．2．MgCl2對(duì)出毒水平的影響????????????????????????．323．3．DMEM作為生長(zhǎng)培養(yǎng)基，DMEM／M199作為維持培養(yǎng)基模式下，對(duì)HEV出毒水平的影響???????????????????
