程序化設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物與克隆小菜蛾酯酶基因

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2、kyl技術(shù)與方法3程序化設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物與克隆小菜蛾酯酶基因33黃菁王少麗喬傳令k中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所o農(nóng)業(yè)蟲鼠害綜合治理研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室北京tsss{slΑυτοματεδπρογραμμινγοφδεγενερατεπριμερσανδτηεχλονινγοφτηεδιαμονδβαχκεστερασεγενεq33?±ao?≥?¤22?o±≤?∏¤±2?±akΙνστιτυτεοφΖοολογψo(hù)ΧηινεσεΑχαδεμψοφΣχιενχεσoτηεΣτατεΚεψΛαβο2ρατορψοφΙντ

3、εγρατεδΜαναγεμεντοφΠεστΙνσεχτσανδΡοδεντσo¨??±atsss{so≤??±¤lqΑβστραχτ·??¤±2μ°¤ˉ?·μ¤·¨a?·2|ˉ2±¨3μ2·¨?±?¤°?ˉ?|∏??±a·?¨§¨a¨±¨μ¤|?2?·?¨|2§¨·2§¨??a±°≤3μ?°2¨μ??μ2°3μ2·¨?±°∏ˉ·?3ˉ¨2?¨′∏¨±|¨¤ˉ?a±°¨±·?q??·?·?¨·22ˉ?2?￥ˉ¤?·3o￥ˉ2|?°¤?¨μo≤2§¨23o≥o???°μ2·o¤±§≥3×μ∞o§¨a¨±¨μ¤·¨3μ?°¨μ?o¨μ¨§¨??a

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5、·22￥·¤?±?±a?3¨|???|×2°≤3μ2§∏|·qΚεψωορδσ§¨a¨±¨μ¤·¨3μ?°¨μ§¨??a±o≤2§¨23?±?¨|·¨?·¨μ¤?¨a¨±¨o×2°≤摘要利用遺傳密碼簡(jiǎn)并性o針對(duì)特定的氨基酸序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物o是克隆蛋白質(zhì)家族|的常規(guī)方法?文章介紹了利用￥ˉ¤?·3o￥ˉ2|?°¤?¨μo≤2§¨23o≥o???°μ2·o≥3×μ∞等網(wǎng)絡(luò)工具及數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)昆蟲抗性酯酶的簡(jiǎn)并引物?用這對(duì)引物從抗有機(jī)磷殺蟲劑的小菜蛾Πλυτελλαξψλοστελλα中克隆了t段|?經(jīng)￥ˉ¤?·?檢索a¨±¨￥¤±?o發(fā)現(xiàn)此|產(chǎn)物與其它

6、昆蟲抗性酯酶基因有高度的相似性?研究表明o程序化設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物可信性強(qiáng)o陽(yáng)性率高o能迅速得到滿意結(jié)果?關(guān)鍵詞簡(jiǎn)并引物設(shè)計(jì)o≤2§¨23o昆蟲酯酶基因o×2°≤酯酶基因擴(kuò)增是昆蟲抗藥性形成的主要機(jī)昆蟲酯酶序列?經(jīng)多序列比對(duì)軟件￥ˉ2|?°¤?¨μ理?但目前與抗性相關(guān)酯酶基因的克隆還僅限分析o得出它們無(wú)間隙的氨基酸序列保守區(qū)≈t?于蚊蟲!蚜蟲!果蠅等少數(shù)模式昆蟲?小菜蛾kˉ2|??l?最后用≤2§¨23k≤±?¨±?∏?2∞a¨±¨μ2Πλυτελλαξψλοστελλα是世界性的害蟲o主要危害十¤·¨?￥μ?§ˉ?a2±∏|ˉ¨2·?§¨°μ?°

7、¨μ?l針對(duì)這些保守字花科蔬菜?近年研究表明o小菜蛾的抗藥性區(qū)設(shè)計(jì)出多條簡(jiǎn)并引物?以其中t對(duì)引物對(duì)小≈u?菜蛾|進(jìn)行擴(kuò)增o得到t條單一的條形成也與酯酶活性的增加密切相關(guān)?但從a¨±¨￥¤±?中o尚無(wú)小菜蛾酯酶基因被克隆的報(bào)帶?°≤產(chǎn)物經(jīng)克隆測(cè)序o并經(jīng)￥ˉ¤?·?檢索道?已發(fā)表的應(yīng)用于克隆昆蟲抗性相關(guān)酯酶基a¨±¨￥¤±?o證明此段|為酯酶家族新基因?因的簡(jiǎn)并引物o因簡(jiǎn)并性高o×2°≤產(chǎn)物假陽(yáng)1材料和方法性多o限制了對(duì)小菜蛾抗性分子機(jī)理的深入研究?因此針對(duì)昆蟲酯酶序列設(shè)計(jì)一對(duì)高度特異111材料性的簡(jiǎn)并引物進(jìn)行昆蟲抗性相關(guān)基因的克隆變11111主要

8、軟件￥ˉ¤?·3k≤o≥l~￥ˉ2|?2得尤為重要?3中國(guó)科學(xué)院知識(shí)創(chuàng)新項(xiàng)目k≥≤÷u2st2sul資助?本文介紹的方法是先從≥o???°μ2·n33通訊作者o∞2°¤?ˉ}′?¤2|ˉ3¤±§¤q?2?q¤|q|±≥3×μ∞蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索出w條抗性相關(guān)收稿日期}usst2tt2vso修回日期}ussu2sx2u{oussu2sz2tt再修回ussuv

9、kyl昆蟲知識(shí)∞×≤?∞∞#wx

10、#°¤?¨μk?쨧∏·|??±?2±≤¤±|¨μ¨?¨¤μ|?≤¨±·¨μot°?±ozuεt°?±o共進(jìn)行vx次循環(huán)o最后在≥l~≤2§¨23k?쨧

11、∏·|??±?2±≤¤±|¨μ¨?¨¤μ|?zuε延伸ts°?±?≤¨±·¨μo≥l~￥ˉ¤?·?k≤o≥l蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)11112昆蟲材料抗性小菜蛾Π