hbx對(duì)肝細(xì)胞hmgb1表達(dá)的影響

《hbx對(duì)肝細(xì)胞hmgb1表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、中圖分類號(hào)墾三!UDC魚lQ碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q§量三密級(jí)公玨HBx對(duì)肝細(xì)胞HMGBl表達(dá)的影響TheinnuenceofHBxtoHMGB1inliVerceUs作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：副指導(dǎo)老師：李佳臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)(感染病科)湘雅醫(yī)院范學(xué)工教授李寧副教授論文答辯日期2旦，緝蜩必B答辯委員會(huì)主席2鯉一中南大學(xué)2013年5月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究

2、成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明。作者簽名：簽筵。日期：趟f蘭年j二月苴日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者簽名：絲導(dǎo)

3、師簽名日期：業(yè)年上月趣曰HBX對(duì)肝細(xì)胞HMGBl表達(dá)的影響摘要目的：構(gòu)建表達(dá)船x的HBx．pcDNA3．1質(zhì)粒，觀察船X對(duì)刪GBl的表達(dá)的影響；并篩選出能有效抑制HMGBl表達(dá)的小干擾RNA，為探索船x、HMGBl的相互關(guān)系奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：從HepG22．15細(xì)胞擴(kuò)增出野生型HBX基因片段并連接到pcDNA3．1載體質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到兩種不同的肝細(xì)胞株(H印G2、L02細(xì)胞)，用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)HBx的細(xì)胞，觀察瞬時(shí)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后及穩(wěn)定表達(dá)瑚x的細(xì)胞系中刪GBl的蛋白表達(dá)水平。用Lip02000脂質(zhì)體將三種下調(diào)刪GB1表達(dá)

4、的小干擾RNA(si．RNA)轉(zhuǎn)入HepG22．15細(xì)胞，篩選出干擾蹦GBl表達(dá)最有效的一種，為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。結(jié)果：皿X基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，HepG2及L02細(xì)胞中蹦GBl表達(dá)均明顯上升；穩(wěn)定細(xì)胞系HepG2．船x建系一個(gè)月后，蹦GBl表達(dá)水平仍較陰性質(zhì)粒對(duì)照組高：穩(wěn)定細(xì)胞系L02．冊(cè)x建系若干年后，刪GBl表達(dá)水平較空白質(zhì)粒對(duì)照組表達(dá)下調(diào)。成功篩選出有效干擾ⅧⅥGBl表達(dá)的si．I心A。結(jié)論：成功構(gòu)建了耶x表達(dá)質(zhì)粒，皿X基因可上調(diào)蹦GBl的表達(dá)。關(guān)鍵詞：HBV；HBx蛋白：刪GBl；肝癌TheinnuenceofHBXt

5、oHMGBlinlivercellsAbstractObjective：Inordert0investigatemepotentialrelationShipofHBx●proteinaIldHMGB1，whicharecloselyrelatedtoHCCrespectiVely，weconstmctHBx-pcDNA3．1plasmidSandtr齜sf-ectthemintotwodifferentlivercenlines，todetectt11epr稅einleVelofHMGB1．Inaddition，weselect

6、asi．RNAw11ichcallknockdowntheeXpressionofHMGB1effectivelytofhnherStudymeinteractionofHBxproteinand刪GBl．Method：We鋤pli母theHBxgene6．omHepG22．15cell1ineaIldco皿ectittoplasmidpcDNA3．1．Thenwet舢sfecttheconstmctedplasmidintoHepG2a11dL02cellsanduse(抖18toselectthecellswhichcaIls

7、tablyeXpressHBxprotein，toimitatemeacutea11dc11ronicinfectionofHBVXgene．Detectionoftheprotein1eVerofHMGB1inbothtransienttransfectionaJldstable住ansfectioncellsarefollowed．haddition，weuseLipofect鋤ineTM2000totmsfect衄eesi-RNAswhichcanknockdowntheexpressionofHMGB1intoH印G22．

8、15cellstoselectthemostefjf’ectiveone，getpreparedfor缸恤erstudyoftheinteractionof}玎3xand}MGB1．RksuIts：Thereisanup．regulationofm