南蛇藤提取物通過影響mtor信號通路抑制人大腸癌ht-29細胞轉(zhuǎn)移的分子機制研究

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1、馬慧：南蛇藤提取物通過影響roTOR信號通路抑制人大腸癌HT-29細胞轉(zhuǎn)移的分子機制研究三南蛇藤提取物通過影響mTOR信號通路抑制人大腸癌HT-29細胞轉(zhuǎn)移的分子機制研究中文摘要大腸癌是發(fā)病率和致死率較高的惡性腫瘤之一，約50．60％的大腸癌患者會出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移是大腸癌的顯著特點之一，也是大腸癌致死的主要原因。腫瘤的轉(zhuǎn)移過程包括血管生成、細胞粘附、侵襲、轉(zhuǎn)移及增殖等，這一過程受許多極其復雜的信號通路的調(diào)控。其中，哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin，mTOR)信號通路備受關(guān)注。mTOR是一種高度保守的絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶，在腫瘤

2、侵襲、遷移及轉(zhuǎn)移過程中起著極其關(guān)鍵的作用。mTOR被認為是Akt的下游，并通過激活4E—BPl矛Ip70S6K調(diào)控多種腫瘤相關(guān)蛋白的翻譯。最近有文獻表明mTOR信號通路通過增JJNMMP．9(matrixmetalloproteinase．9，MMP．9)的表達，促進細胞的侵襲和遷移。MMP．9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要成員，主要的生理作用是降解細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用。因此，抑制mTOR信號通路可作為治療大腸癌的潛在手段。南蛇藤(CelastrusOrbiculatusThunb．)在我國廣泛分布，主

3、要用于治療風濕和其他炎癥。我課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)，南蛇藤提取物(CelastrusOrbiculatusextracts，COE)可通過抑制腫瘤細胞的增殖、侵襲、粘附及血管生成能力從而發(fā)揮顯著的體內(nèi)外抗腫瘤活性。本研究首次對COE體外抗人大腸癌HT-29細胞轉(zhuǎn)移進行研究。結(jié)果證實，COE可抑制HT-29細胞增殖、侵襲及遷移能力，并呈濃度依賴性。并進一步探討COE對mTOR信號通路相關(guān)蛋白的影響，該信號通路與大腸癌轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。結(jié)果表明COE能降低HT-29細胞mTOI通路相關(guān)蛋白的表達水平。綜上，本研究初步表明南蛇藤提取物能體外抑$1JHT．29細胞轉(zhuǎn)移相關(guān)過程，包括

4、增殖，侵襲及遷移。該抑制作用可能與其下調(diào)mTOR信號通路有關(guān)。本研究為此藥的進一步開發(fā)與臨床應(yīng)用提供有力的實驗依據(jù)。本研究共分為兩部分內(nèi)容。揚州大學碩士論文學位三＼卿掣燃第一部分南蛇藤提取物對人大腸癌細胞HT-29增殖、侵襲及遷移的影響研究目的：研究南蛇藤提取物(CelastrusOrbiculatusextracts，COE)對人大腸癌細胞HT-29增殖、侵襲、遷移的影響。研究方法：體外培養(yǎng)人大腸癌HT-29細胞，設(shè)COE組(濃度分別為20，40，80，160，320I，tg／mL)、陰性對照組和陽性對照組。采用MTT實驗檢測COE對HT-29細胞增殖的抑制作用；倒置

5、顯微鏡觀察COE對HT-29細胞形態(tài)的改變；采用Transwell侵襲實驗檢測COE對HT-29細胞侵襲能力的改變；采用細胞劃痕實驗和Transwell遷移實驗檢測COE對HT-29細胞遷移能力的改變。研究結(jié)果：COE能抑制HT-29細胞的增殖能力，呈明顯的濃度依賴性；COE20，40，80gg／mL能顯著降低HT-29細胞的侵襲和遷移能力(P<0．05或P<0．01)，并呈濃度依賴性。研究結(jié)論：COE能有效抑制人大腸癌HT-29細胞增殖，并能抑制其侵襲和遷移能力。關(guān)鍵詞：南蛇藤提取物；增殖；侵襲；遷移第二部分南蛇藤提取物對HT-29細胞mTOR相關(guān)信號通路蛋白表達的影

6、響研究目的：探討南蛇藤提取物(COE)對mTOR信號通路相關(guān)蛋白的影響，該信號通路與大腸癌轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。研究方法：不同濃度COE(20，40，80，160，320“g／n也)處理人大腸癌HT-29細胞24h后，提取各組的總蛋白。Westernblot法檢測各組細胞蛋白的表達水平。檢測的蛋白包括mTOR及mTOR信號通路上下游調(diào)控蛋白Akt，p70S6K，4E．BPl和MMP．9。研究結(jié)果：COE能降低HT-29細胞中mTOR，p-mTOR，p-4E—BPl，p-p70S6K，p70S6K和MMP．9蛋白的表達水平，并呈濃度依賴性。研究結(jié)論：COE抑制HT-29細胞的

7、轉(zhuǎn)移機制可能與其抑制mTOR信號通路有關(guān)。關(guān)鍵詞：南蛇藤提取物；mTOR；信號通路馬慧：南蛇藤提取物通過影響mTOR信號通路抑制人大腸癌HT-29細胞轉(zhuǎn)移的分子機制研究三CelastrusOrbiculatusExtractcouldinhibithumancolorectalcarcinomaHT-29cellsmetastasisviappre"ofthemTORs："gnalingpathwa3SUresslontilepathwayS：AbstractColorectalcancerisoneofthemostfrequentca