twist在骨肉瘤轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中作用及機制

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1、中圖分類號UDCR738。l601博士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級10533Twist在骨肉瘤轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中作用及機制TheEffectandMechanismofTwistonMetastasisandEpithelialMesenchymalTransitionofOsteosarcoma作者姓名：尹科學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：外科學(xué)(骨科專業(yè))學(xué)院(系、所)：湘雅醫(yī)院指導(dǎo)教師：廖前德教授論文答辯日期p。乃●9答辯委員會主席中南大學(xué)二O一三年五月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡

2、我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：盟日期：盟年』月叢日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國

3、學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。撇名：盟翩簽磁期：旦年三月旦日博士學(xué)位論文中文摘要Twist在骨肉瘤轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中作用及機制摘要目的：1．研究Twist基因在骨肉瘤組織的表達情況，探討Twist對骨肉瘤患者診斷、預(yù)后的關(guān)系；2．通過沉默Twist基因表達，觀察Twist基因?qū)侨饬黾毎鸐G一63中EMT相關(guān)蛋白表達及細胞生物學(xué)行為能力的影響，分析Twist基因?qū)侨饬鲛D(zhuǎn)移及EMT的作用和機制。方法：1．使用免疫組化方法檢測107例骨肉瘤患者和25例骨纖維結(jié)構(gòu)不良組織患者石蠟標(biāo)本中Twist基因表達情況，結(jié)合

4、患者臨床資料分析Twist基因表達與年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤位置、病理亞型、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等臨床特征之間的聯(lián)系；2．使用免疫組化方法檢測107例骨肉瘤患者石蠟標(biāo)本中E鈣粘蛋白基因表達情況，使用Spearman等級相關(guān)檢驗分析Twist基因表達與E鈣粘蛋白表達的關(guān)系，使用Kaplan—Meier法和對數(shù)秩檢驗分析Twist基因表達與E鈣粘蛋白表達與骨肉瘤患者生存率的關(guān)系，使用多因素Cox回歸分析預(yù)測骨肉瘤患者預(yù)后風(fēng)險因素；3．采用脂質(zhì)體法在骨肉瘤細胞MG-63中轉(zhuǎn)染特異性TwistsiRNA，采用RT—PCR法和Western-blot法檢

5、測TwistmRNA和蛋白表達，篩選干擾效率最佳的siRNA；采用RT—PCR法和Western-blot法檢測E鈣粘蛋白、N鈣粘蛋白、B一環(huán)連蛋白的mRNA和蛋白表達；采用MTT法檢測細胞增殖情況，采用流式細胞儀檢測細胞周期、細胞凋亡情況，采用Transwell小室遷移、侵襲實驗檢測細胞遷移能力和侵襲能力。結(jié)果：1．骨肉瘤標(biāo)本中Twist陽性表達率為31．8％(34／107)顯著性高于骨纖維結(jié)構(gòu)不良標(biāo)本中Twist陽性表達率8．0％(2／25)，(斥5．776，P

6、要52．8％(28／53)高于無腫瘤轉(zhuǎn)移的Twist表達陽性率11．1％(6／54)，(if=21．474，P<0．05)。2．骨肉瘤標(biāo)本中E鈣粘蛋白陽性表達率為20．6％(22／107)；E鈣粘蛋白陽性表達與骨肉瘤病理亞型、轉(zhuǎn)移臨床特征相關(guān)(斥10．046，Y<0．05；斥11．548，P<0．05)；E一鈣粘蛋白表達與Twist表達在骨肉瘤標(biāo)本中為負相關(guān)(肝一0．209，P<0．05)；Twist表達陽性的骨肉瘤患者總體生存率和無病生存率比Twist表達陰性的骨肉瘤患者低(均P<0．05)，E鈣粘蛋白表達陰性的骨肉瘤患者總體生存率低

7、于E鈣粘蛋白表達陽性的骨肉瘤患者(尸<0．05)，E鈣粘蛋白表達陰性的骨肉瘤患者與E鈣粘蛋白表達陽性的骨肉瘤患者在無病生存率方面無顯著性差異(D0．05)；年齡和Twist表達是影響無病生存率和總體生存率的獨立風(fēng)險因素(均P<0．05)。3．三組TwistsiENA陽性組中TwistsiRNA#806組沉默Twist基因效果最明顯；利用RT—PCR和Western—bloting檢測：E鈣粘蛋白mRNA和蛋白的表達水平TwistsiRNA#806組高于TwistsiRNA#NC組和空白組(P<0．05)；N鈣粘蛋白和B一環(huán)連蛋白的mRN

8、A和蛋白的表達水平TwistsiRNA#806組低于TwistsiRNA#NC組和空白組(Y<0．05)；4．在12h、24h、48h、72h時MTT結(jié)果顯示TwistsiRNA#806組細胞增殖明顯低于T