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《尿路致病性大腸桿菌外膜蛋白t的致病機理研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文尿路致病性大腸桿菌外膜蛋白T的致病機理研究RolesofuropathogenicEscherichiacolioutermembraneproteinTinpathogenesisofurinarytractinfection課題來源：國家自然科學基金項目(30972637)學位申請導師姓專業(yè)名培養(yǎng)類培養(yǎng)層所在學人屈婭榮名曹虹教授稱病原生物學型學術型次碩士研究生院公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學學院答辯委員會主席彭濤研究員答辯委員會委員江振友教授芮勇宇教授趙衛(wèi)教授吳英松教授2013年
2、4月30日廣州碩士學位論文IHilillllillililiiHiilJ／fiY2405749尿路致病性大腸桿菌外膜蛋白T的致病機理研究碩士研究生：屈婭榮指導教師：曹虹教授摘要一、研究背景和目的尿路感染(晌arytractiafcction，UTI)，簡稱尿感，是指病原體侵入尿路粘膜或組織引起的尿路炎癥。根據(jù)感染部位，尿路感染可分為下尿路感染和上尿路感染，前者主要為膀胱炎，后者為腎盂腎炎，腎盂腎炎又可分為急性和慢性。根據(jù)Hodson標準【lJ，急性腎盂腎炎是細菌入侵腎臟，引起急性間質(zhì)腎小管炎；而慢性腎盂腎
3、炎，又有靜脈腎盂造影典型腎盂腎炎的影像學表現(xiàn)。根據(jù)有無基礎疾病，尿路感染還可分為復雜性尿感和非復雜性尿感。UTIs可以發(fā)生在任何年齡，男性的發(fā)病率約為0．3％，而在65歲以后，由于前列腺疾病和泌尿外科手術，其發(fā)病迅速增加到13％～14％【21。由于女性的特殊生理構造，女性比男性更易感，據(jù)統(tǒng)計，大約有81％的UTIs發(fā)生在女性，年齡在16到35歲之間，其中27％女性在初次尿路感染后半年內(nèi)復發(fā)，約有48％的女性一年內(nèi)受到UTIs復發(fā)的困擾。尿路感染是臨床最為常見的細菌感染之一，目前治療主要以使用抗生素為主，由
4、于致病菌臨床的耐藥性越來越強，使其容易反復發(fā)作。反復發(fā)作的尿路感染不僅使病人遭受痛苦也在全球造成很大的醫(yī)療和經(jīng)濟負擔。大部分尿路致病菌都起源于腸道，經(jīng)尿道上行至膀胱。約95％的W'ns的起始感染部位是膀胱，在尿路感染中，由尿路致病性大腸桿菌(Uropamogeme蜘ch／aco／／，UPEC)弓I起的UTIs占800／0"、9C％。目前主要的研究工作是圍繞UPEC展開的。中文摘要絕大多數(shù)UPEC都攜帶ompT基因，其編碼的外膜蛋白T(outermembraneproteinT，OmpT)是一種在變性溶液中
5、都具有很強活性的蛋白水解酶，因其引起外源表達蛋白的嚴重降解而引起關注。OmpT作為一種多活性蛋白酶，它是引起外源充足蛋白降解的重要的蛋白水解酶之一，在尿路感染中有重要的作用。其底物及切割位點的不同均可引起其作用活性的改變，OmpT主要識別水解由堿性氨基酸Arg和Lys殘基組成的肽鍵。研究發(fā)現(xiàn)OmpT與鼠耶爾森桿菌Pla有47％同源的性【3】。有研究證明Pla可以增強細菌黏附到細胞外基質(zhì)并可以激活纖溶酶原轉(zhuǎn)換為纖溶酶，促進細胞外基質(zhì)的降解而致病的功能。OmpT是否也具有與細胞外基質(zhì)相互作用影響尿路致病性大腸
6、桿菌的黏附侵襲而致病呢?本課題中，我們利用本實驗室前期構建的尿路致病性大腸桿菌CFT073的ompT基因敲除株和回補株COTD(pST)，進行一系列實驗研究。我們對ompT野生株CFT073和敲除株COTD對體外細胞模型和對細胞外基質(zhì)的黏附情況進行考察。通過建立人膀胱癌移行上皮細胞5637細胞模型，并提取細胞外基質(zhì)，考察OmpT與細胞外基質(zhì)相互作用的情況。結果發(fā)現(xiàn)與野生株CFT073相比敲除株COTD的黏附率明顯降低，推測OmpT可能會增強致病菌對細胞外基質(zhì)的黏附能力，為后續(xù)的降解細胞外基質(zhì)，促進細菌進入
7、胞內(nèi)打下基礎。流行病學分析表明，多數(shù)UPEC中的ompT與切，懈、cnfl、sfa、prf,iha、iroN等基因密切相關，研究表明ompT與這些毒力基因在遺傳學上并非緊密連接，推測其功能與這些毒力基因的相互調(diào)控相關14J。由于基因的表達調(diào)控不是單一的、孤立的，而是彼此聯(lián)系，相互制約的，構成了復雜的基因表達調(diào)控網(wǎng)絡。幾乎所有的細胞活動和功能都受基因網(wǎng)絡調(diào)控，獨立的研究單個基因及其表達幾乎完全不可能確切的反應生命現(xiàn)象本身和內(nèi)在規(guī)律。所以我們在本研究中通過熒光定量PCR方法分析ompT基因與細菌主要黏附毒力基
8、因iha和毒力基因iroN的關系，明確OmpT是否在調(diào)控毒力基因的表達中起到一定的作用。同時我們通過建立小鼠急性尿路感染的動物模型，比較野生株CFT073與ompT基因缺失株COTD所致尿路感染小鼠的泌尿器官的病理改變的差異，比較產(chǎn)生菌血癥的差異和膀胱和腎臟組織中的細菌組織載量的不同，考察OmpT在II碩士學位論文致炎過程中的作用。其次，我們采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunoadsordentassa
