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1、第38卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究報(bào)告第1期2010年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry8～12殝檵檵檵檵檵檵檵殝檵檵研究報(bào)告檵檵殝檵檵檵檵檵檵檵殝2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯探針對(duì)熒光和質(zhì)譜的雙增敏作用112，311，2，3付艷艷李肖燕孫志偉秦雪芹夏蓮22*1，2索有瑞李玉林尤進(jìn)茂1(生命有機(jī)分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，曲阜師范大學(xué)化學(xué)科學(xué)學(xué)院，曲阜273165)23(中國科學(xué)院西北高原生物研究所，西寧810001)(中國科學(xué)院研究生院，北京100049)摘要采用3種不同衍生方法對(duì)胺類化合物進(jìn)行標(biāo)記，比較衍生效率的差別，給出最優(yōu)方法:5
2、-(2-羥乙基)-(苯并吖啶酮與N，N-羰基雙咪唑(CDI)縮合形成的雙敏感探針2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯(BAEIC)與胺的衍生效率最高，產(chǎn)物穩(wěn)定。BAEIC在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶劑中以4-二甲氨基吡啶(DMAP)為催化劑，在80℃條件下與胺反應(yīng)生成的親核取代物，不僅表現(xiàn)出強(qiáng)烈的熒光，同時(shí)具有很強(qiáng)的質(zhì)譜離子化能力。估算了衍生物在乙腈和甲醇水溶液中百分離子化值δ在5.62%～58.08%和2.14%～56.58%范圍內(nèi)。本方法具有良好的重現(xiàn)性，激發(fā)和發(fā)射波長為λex/λem=280/510nm，熒光檢出限為0.12～0.59μg/L(8.6～79fmol);在線A
3、PCI-MS檢出限為1.9～14μg/L(544～825fmol)。關(guān)鍵詞液相色譜-質(zhì)譜;脂肪胺;5-(2-羥乙基)-苯并吖啶酮;2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯1引言質(zhì)譜和熒光技術(shù)廣泛應(yīng)用于環(huán)境科學(xué)、毒物學(xué)及生命科學(xué)等領(lǐng)域中，用于確定諸多生物活性分子的［1～3］含量及化學(xué)結(jié)構(gòu)。環(huán)境中的胺多是由蛋白質(zhì)、氨基酸等含氮類有機(jī)化合物經(jīng)生物降解而成。大多［4～8］數(shù)胺類化合物在亞硝化劑存在下可生成強(qiáng)致癌性的N-亞硝基化合物，因此，檢測環(huán)境中的胺具有［9］［10］重要意義。目前，檢測胺的方法主要有氣相色譜法和離子交換法。盡管方法簡便易行，但由于靈敏度低而受到限制。為提高檢測靈敏度和改善選擇性
4、，采用柱前或柱后衍生化是一種行之有效的手段。［11～14］但測定胺類化合物所用試劑較多，如常用熒光試劑FMOC-Cl衍生化時(shí)，過量試劑易造成柱效降低。此外，試劑對(duì)脯氨酸和半胱氨酸衍生物表現(xiàn)出很弱的熒光，準(zhǔn)確定量存在困難。［15～18］盡管多種胺類測定試劑具有很強(qiáng)的熒光靈敏度，然而它們?cè)贏PCI-MS中的質(zhì)譜離子化能力相對(duì)低，這對(duì)同時(shí)獲得在線的高靈敏質(zhì)譜鑒定十分不利。本研究制備了一種能同時(shí)滿足熒光和質(zhì)譜增敏的雙敏感探針分子。結(jié)果表明，2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯(BAEIC)中間體與胺的親核取代產(chǎn)物具有高熒光靈敏度及很強(qiáng)的質(zhì)譜離子化能力。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器與試劑1100離子阱液
5、相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配備四元梯度泵、在線真空脫氣機(jī)、熒光檢測器和自動(dòng)進(jìn)樣器(美國Agilent公司);大氣壓化學(xué)電離源(APCISource);Delta600半制備色譜(美國Waters公司)。F-7000熒光分光光度計(jì)(日本Hitachi公司)。12種脂肪胺標(biāo)準(zhǔn)品(美國Sigma公司);乙腈(色譜純，禹王試劑公司);5-(2-羥乙基)-苯并吖啶酮(HBA，自制);2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯(BAEIC，自制);N，N-羰基二咪唑(CDI)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)等其它試劑均為分析純。2009-05-09收稿;2009-08-14接受本文系國家自然科學(xué)基金(No.20
6、075016)和中科院“百人計(jì)劃”(No.328)資助項(xiàng)目*E-mail:jmyou6304@163.com第1期付艷艷等:2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯探針對(duì)熒光和質(zhì)譜的雙增敏作用92.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制分別稱取12種脂肪胺標(biāo)品，用乙腈配成濃度為0.1mol/L溶液，相應(yīng)低濃度12種脂肪胺混合溶液－3(2.0×10mol/L)用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)稀釋而成。稱取0.1156gHBA用DMF定容至10mL，濃度為0.04mol/L。稱取0.1532gBAEIC用DMF定容至10mL，濃度為0.04mol/L。稱取0.2gDMAP，用DMF定容至10mL，濃度為20g/L。稱
7、取0.1gCDI，用DMF定容至10mL，濃度為10g/L。2.3色譜與質(zhì)譜條件Akasil-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm，美國艾杰爾科技公司)。流動(dòng)相A:30%乙腈(含20mmol/LHCOONH4，pH3.74);流動(dòng)相B:100%乙腈。梯度洗脫程序:0～30min，10%～100%B，保持10min。流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量10μL，柱溫30℃。熒光激發(fā)和發(fā)射波長分別為280和510nm。質(zhì)譜條件:大氣壓化學(xué)電離源(APCIsource)
