表達(dá)大腸桿菌ltak63與ltb蛋白重組干酪乳桿菌系統(tǒng)的構(gòu)建及其黏膜佐劑活性的評價

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1、ClassifiedIndex:Confidential(yes/no):110Code:10224N0.1006425DissertationfortheMasterDegreeConstructionofRecombinantLactobacillusCaseiExpressionLTAK63andLTBofE.coliandMucosalAdjuvanticityEvaluationCandidate:Supervisor:DegreeCategory:College:Firstleveldiscipline:Secondleveldiscipli

2、ne:HarbinJuneChenChaoyangProf.LiYijingMasterofAgricultureVeterinaryMedicineVeterinaryMedicinePreventiveVeterinaryMedicineChina2013目錄/㈣2.2.6重組干酪乳桿菌灌胃免疫小鼠FaeG抗體的監(jiān)測??????????????252.2.7重組干酪乳桿菌灌胃免疫小鼠攻毒保護(hù)性試驗(yàn)???????????????。263.I.2重組質(zhì)粒pMDl8-Ts.LTA、pMDl8-Ts.LTB和pMDl8·Ts-rsLTB的鑒定結(jié)果?。28東北

3、農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文3.1.3用PCR重疊延伸法突變LTA基因???????????????????。293.1.4重組質(zhì)粒pMDl8-Ts-LTAK63、pMDl8-Ts-LTAK63t的鑒定結(jié)果??????..293.2LTB單克隆抗體的制備??????????????????????????303.2.1抗原制備及其GMI結(jié)合活性檢測????????????????????303.2.2雜交瘤細(xì)胞的檢測與細(xì)胞株的建立???????????????????3l3.2.3單克隆抗體的特異性檢測???????????????????????3l3.2

4、.4雜交瘤細(xì)胞分泌抗體穩(wěn)定性的分析???????????????????.323.2.5雜交瘤細(xì)胞株染色體分析???????????????????????333.3LTA基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)和免疫原性分析?????????????。333.3.1原核表達(dá)載體pET-28a-LTA的構(gòu)建???????????????????333.3.2LTA基因在大腸桿菌中表達(dá)產(chǎn)物的SDS.PAGE鑒定????????????343.3.3重組蛋白LTA表達(dá)鑒定及純化????????????????????。353.3.4間接ELISA檢測重組LTA抗血清效價?

5、????????????????。353.3.5重組蛋白LTA抗原性的檢測?????????????????????。353.4重組干酪乳桿菌表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建??????????????????????363.4.1重組干酪乳桿菌表達(dá)載體的構(gòu)建????????????????????363.4.2表達(dá)L1lAK63t-rsLTB、LTAK63.LTB重組干酪乳桿菌的構(gòu)建????????383.5重組干酪乳桿菌的誘導(dǎo)及表達(dá)蛋白的鑒定?????????.:????????393.5.1表達(dá)產(chǎn)物的SDS.PAGE鑒定??????????????????????3

6、93.5.2表達(dá)產(chǎn)物的WesternBlot鑒定?????????????????????。393.6重組干酪乳桿菌對FaeG誘導(dǎo)特異性免疫應(yīng)答的影響?????????????.403.6.1免疫小鼠血清中抗FaeG特異性抗體IgG測定??????????????.403.6.2免疫小鼠外生殖道沖洗液抗FaeG特異性slgA檢測結(jié)果??????????413.6.3免疫小鼠鼻腔沖洗液抗FaeG特異性sIgA檢測結(jié)果????????????423.6.4免疫小鼠糞便中抗FacG特異性sIgA檢測結(jié)果??????????????.433.6.5免疫小鼠脾淋巴

7、細(xì)胞增殖試驗(yàn)?????????????????????.“3.7重組干酪乳桿菌灌胃免疫小鼠保護(hù)性試驗(yàn)?????????????????.“3.7.1K88:*ETEC對小鼠最小致死量的測定結(jié)果????????????????。443.7.2免疫小鼠的攻毒保護(hù)性試驗(yàn)結(jié)果????????????????????454討論??????????????????????????????????????????????464.1課題的研究思路?????????????????????????????464.2LTB單克隆抗體的制備??????????????????

8、???????.464.3L1’AK63與LTB基因在重組干酪乳桿菌中的表達(dá)??

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