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1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文幽門螺桿菌KatA及KatA與大腸桿菌LTB融合蛋白的表達(dá)研究姓名：陶惠申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：朱道銀;鄒全明2003.5.1重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文縮寫AmpbpBSAcTC1’ABDABddH20DNAdNTPDTTEBEcoliEDTA叫SAEpGMl印HRP坤TGK姐KatA如LB英文縮寫一覽表英文全稱ampidllinbasepairbovinesenlmalbumincholerat00dnc螂ltrimethylammoniumbromidediaminobenzidineDeionic
2、distilledw'at,grdeoxyribonucleicaciddeoxyribonucleosidetriphosphatedilhiothrdtolethidiumbromideEscherichiacoliethylenediaminetetmaceficacidenzyme-linkedimmunosorbentassayeppendorfgangliosideGMlHelicobacterpylorihorseradishperoxidaseisopropyl-1thio-B-D-galactosidekanmnycincat
3、aIRsekiloda]tonLuria-Bertaninbroth中文全稱氨芐青霉素堿基對牛血清自蛋白霍亂毒素十六烷基三甲基溴化銨二氨基聯(lián)苯胺去離子水脫氧核糖核酸脫氧核苷三磷酸二硫蘇糖醇溴化乙錠大腸桿菌乙二胺四乙酸酶聯(lián)免疫吸附測定微量離心管神經(jīng)節(jié)苷脂GMl幽門螺桿菌辣根過氧化物酶異丙基學(xué)i．傅B-D半乳糖苷卡那霉素過氧化氫酶千道爾頓LB培養(yǎng)基重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文LTheat-labileentcrotoxin不耐熱腸毒素LTBheat-labileenterotoxinBsubunit不耐熱腸毒素B亞單位rainminute分鐘mlmil
4、liliter毫升ODopticaldensity吸光度OPDo-phenylenediamine鄰苯二胺PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝膠電泳PBSphosphateb墑eredsaIi∞磷酸鹽緩沖液PCRpolymemsechainreaction聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)r／minrevolutionsperminute轉(zhuǎn)，分PVDFpolyvinyfidenedifluoride聚偏二氟乙烯RpmRotationsperminute每分鐘轉(zhuǎn)速SDSsodiumdodccylsulfate十二烷基硫
5、酸鈉TAETris／acetate／(buffer)Tris／Z,酸電泳緩沖液TETris／EDTAbufferTris-EDTA緩沖液’TEMEDN,N,N’N’-tetramethylethylenedisi血eNN’N’，N’一四甲基乙二胺Tris2-Amino-2-hydroxymethyl-1．3·propanediol三羥甲基氨基甲烷UUnit單位lllmicroliter微升x-gal5-bromo-4-chlom-3-indolyl-B-D-galactosidc5-溴一4一氯一3一吲哚．B-D．半乳糖昔重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文
6、幽門螺桿菌Ka埝及KatA與大腸桿菌LTB融合蛋白的表達(dá)研究摘要幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,rip)的高感染率及其嚴(yán)重的危害性，使烯，疫苗成為醫(yī)學(xué)微生物領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一，為探討過氧化氫酶(Catalase，＆I認(rèn))作為基因工程疫苗候選抗原在防治坳感染中的作用，本研究采用PCR方法從埤刈島床分離株中克隆katA基因(katA)，構(gòu)建Hp過氧化氫酶高效表達(dá)載體，并對重組工程菌的表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化；重組蛋白KatA(rKatA)經(jīng)鎳離子親和層析純化后，以Westernblot、ELISA及動物實(shí)驗(yàn)檢測其免疫學(xué)活性。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)
7、一步采用重疊延伸技術(shù)將大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位佤coliheat．1abileenterotoxinBsubunit,LTB)基因qts)和勛蹦基因以不同次序進(jìn)行融合并分別在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，篩選較理想的KatA．LTB融合蛋白表達(dá)載體，以期獲得既具有免疫學(xué)活性又具有粘膜佐劑活性的KatA．LTB融合蛋白，為進(jìn)一，步研制均，分子內(nèi)佐劑亞單位疫苗奠定基礎(chǔ)。／全文結(jié)果與結(jié)論如下：L1．采用PCR技術(shù)分別從我國臨床分離的np菌株及國際標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTCll637中克隆了npkatA基因，序列全長1518bp，推定其編碼氨基酸505個，與NCTCl
8、l637及GenBartk公布的四株np的婦d基因重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文及氨基酸序列比較，堿基一致率大于95％，氨基酸相同率在97％以上。2．構(gòu)建了
