褪黑素對(duì)哮喘小鼠cd4+t淋巴細(xì)胞免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究

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1、分類號(hào)R392密級(jí)公開UDC碩士學(xué)位論文+褪黑素對(duì)哮喘小鼠CD4T淋巴細(xì)胞免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究學(xué)位申請(qǐng)人：文丹丹學(xué)科專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：王敏教授二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicine+TheEffectofMelatoninonImmuneFunctionofCD4TLymphocyteinAsthmaticMiceGraduateStudent:WenDandanMajor:ImmunologySupervisor:Pro

2、f.WangMinChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文三峽大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體均已在文中以明確方式標(biāo)明，本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：三峽大學(xué)研究生知識(shí)產(chǎn)權(quán)承諾書本人承認(rèn)：我作為三峽大學(xué)碩士研究生在校學(xué)習(xí)期間，在導(dǎo)師指導(dǎo)下，依據(jù)研究工作所作學(xué)位

3、論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)全部權(quán)歸三峽大學(xué)所有。本人承諾：我有義務(wù)維護(hù)三峽大學(xué)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，凡是以我本人學(xué)位論文內(nèi)的全部或部分研究成果，或?qū)嶒?yàn)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)所形成的研究論文及成果，無(wú)論是以何種形式刊發(fā)學(xué)術(shù)論文、進(jìn)行成果鑒定或申報(bào)獎(jiǎng)勵(lì)，均以三峽大學(xué)為第一作者單位或完成單位，并事先征得導(dǎo)師或?qū)W校相關(guān)部門的同意。我愿承擔(dān)因違背上述承諾而引起的一切法津和經(jīng)濟(jì)后果。學(xué)位論文作者簽名：日期：I三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文內(nèi)容摘要目的：通過(guò)使用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支氣管哮喘小鼠動(dòng)物模型，設(shè)立不+同的實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，探討褪黑素(MT)對(duì)哮喘小鼠CD4T淋巴細(xì)胞免疫功能的影響及其作用機(jī)制。方法：選擇40只6周齡SPF

4、級(jí)雌性BALB/c小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、哮喘組、褪黑素組、地塞米松(DXM)組，每組10只。采用卵清蛋白致敏方法建立支氣管哮喘小鼠動(dòng)物模型。藥物治療組以褪黑素及地塞米松溶液腹腔注射；正常對(duì)照組與哮喘組以等量生理鹽水腹腔注射。各組小鼠末次霧化吸入24h內(nèi)，蘇木素-伊紅(HE)染色觀察氣道炎癥浸潤(rùn)情況；支氣管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色計(jì)數(shù)炎性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞+(EOS)；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)各組小鼠外周血中CD4T淋巴細(xì)胞數(shù)目；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定外周血清中IL-2、IL-4和IFN-γ的水平；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)肺組織中T-bet、R

5、OR-γt、GATA3、Foxp3mRNA表達(dá)水平的含量。結(jié)果：(1)成功建立哮喘小鼠動(dòng)物模型，各組小鼠肺組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組結(jié)構(gòu)清晰，各級(jí)支氣管上皮完整,肺泡間隔正常,基本無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；哮喘組小鼠支氣管黏膜增厚，皺襞增多,管腔明顯狹窄,氣道上皮損傷、脫落明顯，氣道內(nèi)可見黏液栓，氣道周圍組織疏松水腫，細(xì)支氣管及伴行血管周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)可見嗜酸性粒細(xì)胞，杯狀細(xì)胞增生；褪黑素組和地塞米松組與哮喘組相比，支氣管和血管周圍炎癥明顯減輕，與對(duì)照組比較，無(wú)明顯差異。(2)與正常對(duì)照組相比較，哮喘組氣道炎癥、BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和EOS細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周血中+C

6、D4T淋巴細(xì)胞數(shù)目、血清中IL-4水平以及肺組織中ROR-γt、GATA3mRNA蛋白表達(dá)水平明顯增高(p<0.05)，血清IL-2和IFN-γ水平以及肺組織中T-bet、Foxp3mRNA蛋白表達(dá)水平明顯降低(p<0.05)。與哮喘組比較，治療組氣道炎癥、BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)和EOS+細(xì)胞計(jì)數(shù)、外周血中CD4T淋巴細(xì)胞數(shù)目、血清中IL-4水平以及肺組織中ROR-γt、GATA3mRNA蛋白表達(dá)水平均明顯降低(p<0.05)，而血清IL-2和IFN-γ水平以及肺組織中T-bet、Foxp3mRNA蛋白表達(dá)水平明顯增高(p<0.05)。兩治療組比較，T-bet、Foxp3mRNA蛋白表

7、達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，余各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯差異(p>0.05)。結(jié)論：(1)褪黑素可抑制哮喘小鼠的氣道炎癥，其抑制作用可能與抑制炎癥細(xì)胞+和EOS細(xì)胞的表達(dá)有關(guān)。(2)褪黑素有效減少哮喘小鼠外周血CD4T淋巴細(xì)胞數(shù)目，并能改善外周血清中IL-2、IL-4和IFN-γ水平及肺組織中T-bet、ROR-γt、GATA3、Foxp3mRNA表達(dá)水平的失衡，褪黑素有效減輕哮喘小鼠氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性可能是通過(guò)對(duì)這些炎癥細(xì)胞及因子的調(diào)節(jié)起作用，在哮喘的防治中有良好的應(yīng)用前景。+關(guān)鍵詞：褪黑素支