用cdna微陣列研究內(nèi)毒素休克小鼠肺組織基因表達(dá)譜的改變

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1、·"#*·生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展+,-./01-!234/01-5267/*##*；’8（-）用!"#$微陣列研究內(nèi)毒素休克小鼠肺組織基因表達(dá)譜的改變袁開宇!）趙震宇!）劉瑛鄒江劉梅冬陳廣文尢家肖獻(xiàn)忠!（中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，長沙"!##$%）摘要利用&’()微陣列檢測了小鼠內(nèi)毒素休克*+及*#+肺組織基因表達(dá)譜的改變,發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素休克*+有!*%個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，-個(gè)基因下調(diào)；內(nèi)毒素休克*#+有.!個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，*!個(gè)下調(diào),并用/0123/進(jìn)一步驗(yàn)證了結(jié)果的可靠性,初步分析了基因表達(dá)譜改變的意義,有助于從基因組水平闡明內(nèi)毒素休克的分子機(jī)制,關(guān)鍵詞

2、基因表達(dá)譜，內(nèi)毒素休克，肺，小鼠學(xué)科分類號(hào)/-4-敗血癥休克是常見危重病癥，近年雖采用了強(qiáng)%材料與方法有力的抗生素及有效的支持治療，其死亡率仍高達(dá)［!］-#5!4#5,%&%材料敗血癥休克的病理基礎(chǔ)是全身性炎癥反應(yīng)綜合G?L>／&小鼠購自北京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心；大征（67689:;&;<=>?::?8@A7A96B@<6967［*］，引起DE/D的最主要原因是革蘭氏陰性購自美國NEG3I公司；’(?69$購自/@&+9公司；DE/D）菌胞壁上的內(nèi)毒素，其主要成分為脂多糖（F2D）,&’()

3、微陣列膜（)8>?60OO@P69!Q*)AA?7R;8）購近年來的研究表明，F(xiàn)2D與血液中的F2D結(jié)合蛋自3>@<89&+公司；微陣列密度分析軟件為本科室自白（FG2）結(jié)合，作用于單核細(xì)胞或多形核細(xì)胞膜行開發(fā)；23/引物由上海生工生物公司合成,受體3’!"，激活多種細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶系統(tǒng)，引起%&’內(nèi)毒素休克模型的復(fù)制(H1"G及(H1EF14等轉(zhuǎn)錄因子活化，誘導(dǎo)0(H1#、G?>L／&小鼠均為雄性，體重!%!*"J,G?>L／&EF1!、EH(等促炎因子及EF1"、EF14、EF1!#、EF1小鼠經(jīng)腹腔注射大腸桿菌內(nèi)毒素（溶于生理鹽水，［-，"］!!等抗炎因子

4、的轉(zhuǎn)錄明顯增加,同時(shí)，在敗血!.:J／SJ）后，觀察$*+內(nèi)死亡率，一部分小鼠癥休克的發(fā)生發(fā)展中，一氧化氮（(I）、脂質(zhì)介質(zhì)于注射后*+及*#+摘取心、肝、肺、腎、脾、腦和熱休克蛋白的產(chǎn)生也增多［.］和肌肉組織，用液氮快速冷凍后轉(zhuǎn)至T%#U冰箱保,上述多種因子與靶細(xì)胞相互作用，使得敗血癥休克的病理生理機(jī)制存，對照組僅注射等量生理鹽水,錯(cuò)綜復(fù)雜，至今仍未完全闡明,以往的研究大多只%&()#$提取及去"#$消化處理針對單個(gè)或數(shù)個(gè)細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)及其細(xì)胞信號(hào)用0A;M@>抽提肺組織總/()，’(?69$消化去轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中某個(gè)環(huán)節(jié)，而忽略了多種炎癥介質(zhì)及信除J’()后

5、再用0A;M@>抽提總/()一次，用分光號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的同時(shí)存在及相互作用,因此，過去經(jīng)光度計(jì)測/()濃度及純度,典的研究方法不利于全面系統(tǒng)地闡明敗血癥休克這%&*!"#$探針的標(biāo)記與純化樣極其復(fù)雜的病理生理過程的發(fā)生機(jī)制［4］每樣品取.總/()，加!:>&’()合成引,%J為了系統(tǒng)地了解敗血癥休克發(fā)生發(fā)展過程中多物（&’()67<8+96;6BA;:9A，3’D）（3>@<89&+公個(gè)基因的改變情況，我們利用&’()微陣列司），用C;98+7>B7A@&?AL@

6、3/儀中進(jìn)行反應(yīng)：$#U變性%>小鼠肺組織基因表達(dá)譜（J9<99KBA966;@9）*:;<，.#U復(fù)性*:;<；然后加入-Q.%>#1-*2C)02的變化，試圖發(fā)現(xiàn)某些以前研究中未知的與敗血癥!通訊聯(lián)系人,休克密切相關(guān)的基因及信號(hào)傳導(dǎo)途徑，以便進(jìn)一步!）袁開宇和趙震宇并列為第一作者,闡明其發(fā)生機(jī)制，為其臨床防治提供新的線索,09>：#$-!1"%#."W!，V1:?;>：K;?,&@:收稿日期：*##!1#W1!!，接受日期：*##!1!!1*%萬方數(shù)據(jù)?!!?；+D（O）生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展)38.E:-

7、8逆轉(zhuǎn)錄?!(2-；再用+結(jié)果@$)-7.8A公司327中的純化柱純化探針B探針的放射性強(qiáng)度在C"D+’!#EF以上B+"!小鼠死亡率!"#雜交、洗膜及放射自顯影E4W$

8、／8鼠腹腔注射大腸桿菌內(nèi)毒素于標(biāo)記探針