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《沒食子酸脫羧酶(gad)的分離及其酶學(xué)性質(zhì)研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中國妹考舛學(xué)坼憲院學(xué)位論文萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文作者指導(dǎo)教師姓名指導(dǎo)小組成員申請學(xué)位級別專業(yè)名稱研究方向論文答辯日期李文君王成章王成章(研究員)沈兆邦(研究員)碩士林產(chǎn)化學(xué)加工工程天然資源化學(xué)與利用2015年6月◎中國·北京萬方數(shù)據(jù)DissertationfortheDegreeCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofDefence：LiWen-junWangCheng—zhangShenZhao-ban
2、gMasterChemicalProcessingEngineeringofForestProducts2015—6Degree·-conferring-·institution：ChineseAcademyofForestry萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得本研究生培養(yǎng)單位或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均
3、已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：杏靈磊日期：矽脾6月訂日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解中國林業(yè)科學(xué)研究院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，中國林業(yè)科學(xué)研究院有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國林業(yè)科學(xué)研究院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：杏泛嘉導(dǎo)師簽名：王心0彈≯晦6月訪日夕口曠年彳月玎日1學(xué)位論文作者畢業(yè)聯(lián)系
4、方式工作單位：聯(lián)系電話：13770646021電子郵件：!i鯊星西墜凸魚!!@!魚3：曼Q啦通訊地址、郵編：江蘇省南京市玄武區(qū)鎖金五村16號，210042萬方數(shù)據(jù)摘要五倍子是中國特色林產(chǎn)品，常用作制備沒食子酸(GallicAcid)和焦性沒食子酸(Pyrogall01)的原料。焦性沒食子酸廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥、醫(yī)藥、化妝品、顯影劑、熱敏劑、高分子材料等領(lǐng)域。傳統(tǒng)上，焦性沒食子酸是通過沒食子酸在強酸和強堿催化下化學(xué)脫羧制得，該方法不僅產(chǎn)生大量高色度的廢水，嚴(yán)重污染環(huán)境，而且產(chǎn)品中催化劑殘留難以去除，金屬雜質(zhì)偏高。因此，本課題考察微
5、生物轉(zhuǎn)化沒食子酸制備焦性沒食子酸的新工藝研究，篩選出產(chǎn)沒食子酸脫羧酶(GallicAcidDecarboxylase，GAD)的高產(chǎn)菌株，分離純化GAD，并初步研究了GAD的結(jié)構(gòu)及其酶學(xué)性質(zhì)，結(jié)果表明利用微生物降解沒食子酸制備焦性沒食子酸具有廣闊的發(fā)展前景。論文選擇特定的培養(yǎng)基(即CDM培養(yǎng)基，由O．06％MgS04·7H20、O．4％mH4)2S04、0．2％沒食子酸及30mmol·L’1pH為6．6的磷酸鹽緩沖溶液組成)，以沒食子酸作為唯一碳源進行底物誘導(dǎo)48h，通過發(fā)酵液中沒食子酸降解率和焦性沒食子酸產(chǎn)率的變化，從腸
6、桿菌屬(EnterobacterSpp．，ESpp．)和檸檬酸桿菌屬(CitrobacterSpp．，C．Spp)中篩選出產(chǎn)GAD的產(chǎn)氣腸桿菌(EnterobacterAerogenes，EAerogenes)CICC23008，然后通過6個單因素的考察及響應(yīng)面優(yōu)化，確定優(yōu)化工藝條件為接種量5％，底物濃度0．4％，磷酸鹽緩沖溶液含量25％(pH為6．6)，發(fā)酵溫度32。C，發(fā)酵液初始pH=6，底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)0．32％，焦性沒食子酸平均收率為77．86％。論文重點研究了GAD的分析方法、提取和分離工藝及結(jié)構(gòu)表征。建立了考馬斯亮
7、藍法測定GAD蛋白含量線性方程(Y=4．8485X+0．4865，R2=0．9943)和雙縮脲法測GAD蛋白含量線性方程(Y--0．2476X+0．0003，R2=0．9993)。對EAerogenes在優(yōu)化條件下產(chǎn)生的GAD粗酶液，分別采用pH為6濃度為60％和70％的硫酸銨鹽沉淀32h時效果最好；然后，采用80kD透析膜進行透析純化，若500mL料液則膜處理時間12～16h，透析效果較好；再將透析液經(jīng)二乙氨基乙基(DiethylAminoethanol，DEAE)纖維素樹脂分離純化GAD蛋白，DEAE在pH為6．5時對
8、GAD的靜態(tài)吸附的飽和吸附量可達2．838mg·g．1．在pH=7．5時采用0．4mol·L。NaCl溶液進行洗脫，洗脫液再利用G．75和G．100葡聚糖凝膠純化GAD蛋白樣品，蛋白質(zhì)含量為59．3％，最大吸收波長為225nlTl。采用SDS—PAGE聚丙烯酰胺電泳分離得到蛋白樣品條帶beltl，采用M
