資源描述：
《犬細小病毒病毒樣粒子口服疫苗的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、分類號密級UDC單位代碼10435碩士學位論文犬細小病毒病毒樣粒子口服疫苗的研究OralVaccineofAgainstCanineParvovirusVirus-likeParticles研究生姓名段欣強指導教師王述柏教授單虎教授學科專業(yè)預防獸醫(yī)學研究方向動物傳染病防治及生物制品學中國.青島二0一八年六月OralVaccineofAgainstCanineParvovirusVirus-likeParticlesThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegree
2、ofMasterofAgronomyDuanXinqiang（CollegeofVeterinaryMedicine）Supervisor:Prof.WangShubaiProf.ShanHuQingdao.ChinaJune,2018獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：時間：年月日關于論文使
3、用授權的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。(保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議)研究生簽名：時間：年月日導師簽名：時間：年月日青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要犬細小病毒病毒樣粒子口服疫苗的研究摘要犬細小病毒病(Canineparvovirusdisease,CPVD)是犬細小病毒(Canineparvovirus，CPV)導致犬類以出血性腸炎、心肌炎為主要癥狀并伴隨白細胞減少
4、、嘔吐、腹瀉現(xiàn)象的一種急性高度接觸性傳染病。CPV可通過消化道感染，各年齡和品種的犬均可感染，傳播速度快，發(fā)病率和死亡率高，是犬類主要急性傳染病之一，嚴重影響家養(yǎng)寵物的健康，并對養(yǎng)犬業(yè)帶來特大經(jīng)濟損失。犬細小病毒病的市售疫苗主要為滅活苗和弱毒苗，且以多聯(lián)苗為主，具有較好的免疫效果。CPV具有一定的變異性，所以選擇的CPV弱毒疫苗也可能存在一定的抗原變異性。免疫接種口服疫苗，沒有抗原變異的危險，操作安全、簡單、方便。病毒樣顆粒(viruslikeparticles,VLPs)模擬天然病毒粒子結構，低劑量即可誘導機體產(chǎn)生高效免疫。針對CPV的主要感染途徑及其腸道致病和黏膜免疫的特點，以乳酸
5、菌為載體，設計CPV病毒樣粒子口服疫苗?；钶d體乳酸菌可激發(fā)機體免疫反應。本研究以乳酸乳球菌為遞呈抗原的載體，利用乳酸菌表達系統(tǒng)表達CPVVP2蛋白。進一步證實CPVVLPs體外組裝能力及其免疫原性，是犬細小病毒基因疫苗的一次新的嘗試。為研究乳酸菌表達犬細小病毒VP2蛋白的可行性，本試驗將CPV的VP2目的基因克隆至乳酸菌表達載體pMG36e，電轉化至乳酸乳球菌MG1363。菌液PCR及酶切鑒定正確，提取質粒測序，基因序列與CPV-2a型標準毒株的同源性為99%，測序分析結果正確，成功構建重組表達載體pMG36e-VP2，且成功轉化至乳酸菌。重組乳酸菌經(jīng)誘導表達、蛋白純化后SDS-PAG
6、E和WesternBlot鑒定，獲得蛋白分子大小正確的VP2蛋白，此蛋白與犬源CPV陽性血清發(fā)生特異反應，有良好免疫反應性。本試驗成功獲得表達VP2蛋白的重組乳酸菌，為后續(xù)進行重組乳酸菌的免疫原性分析提供科學基礎。為確定犬細小病毒VLPs的包裝情況，電鏡下觀察，有與天然CPV粒子相似的空心粒子，確認是犬細小病毒VLPs。為鑒定前期構建的重組乳酸菌的臨床效果，測定重組乳酸菌的免疫效果及其抗體水平。以小鼠建立動物模型，通過口服和腹腔注射途徑免疫小鼠重組乳酸菌，間接ELISA檢測小鼠抗體效價，結果證明免疫重組乳酸菌小鼠的抗體變化規(guī)律與免疫CPV弱毒疫苗的相似；且抗體效價明顯高于空白對照，差異
7、極顯著（P<0.01）。采用HI試驗檢測小鼠的血清抗體水平，結果表明重組乳酸菌在小鼠體內的總體免疫原性良好。收集小鼠糞便培養(yǎng)細菌，經(jīng)菌液PCR及雙酶切鑒定，所收集得到的細菌為重組乳酸菌。觀測菌落生長情況，表明免疫后15d內糞便中可持續(xù)檢測到重I青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要組乳酸菌，一定時期內，腸道中乳酸菌定植情況遞減，須定期免疫。綜上所述，本研究成功構建了犬細小病毒VP2基因的乳酸菌表達載體，并在乳酸乳球菌MG1363中得到了高效表達，該VP2
