資源描述：
《滸苔附生菌的初步研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號：M150111225上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題目：滸苔附生菌的初步研究Preliminarystudyonepiphyticbacteria英文題目：OfUlvaprolifera專業(yè)：海洋科學(xué)研究方向：海藻分子生物學(xué)姓名：陳冉指導(dǎo)教師：何培民蔡春爾二O一八年六月四日1上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴謹學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或
2、集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責(zé)，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期
3、：年月日2上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注施定基中科院植物所教授主席孫濤上海交通大學(xué)教授委員王全喜上海師范大學(xué)教授委員賈睿上海海洋大學(xué)副教授秘書答辯地點上海海洋國家大學(xué)科技園答辯日期2018.5.293上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文滸苔附生菌的初步研究摘要附生細菌在藻類生活史中對營養(yǎng)吸收、形態(tài)結(jié)構(gòu)的形成起著關(guān)鍵作用。因為海洋細菌中只有1%的可以培養(yǎng)，而大量為未知的細菌，相對于附生菌，內(nèi)生菌的相關(guān)研究性報道較少。一些大型海藻已經(jīng)有明確存在的內(nèi)生菌[1-2]，且因為細菌生存于藻體內(nèi)部，所以它的隨著環(huán)境的變
4、化程度不大。Aires等人通過分子生物學(xué)技術(shù)中的高通量測序?qū)г澹–.taxifolia）內(nèi)生菌群落結(jié)構(gòu)進行了分析，發(fā)現(xiàn)無論外界環(huán)境發(fā)生什么樣的刺激，內(nèi)生菌群落結(jié)構(gòu)依然保持穩(wěn)定狀態(tài)[3-4]。這些研究結(jié)果都表明藻類的附生菌會因為地域、時間以及生存條件的不同而改變，而內(nèi)生菌組成更加穩(wěn)定和特異，對藻類生長起到了非常關(guān)鍵的作用，這提示需要對內(nèi)生菌與附生菌展開區(qū)別研究[4]?，F(xiàn)在我們可以使用菌群多樣性分析的手段清楚的知道藻類內(nèi)外共生的細菌種類及數(shù)量。對綠潮藻的滸苔屬滸苔種藻體樣品的內(nèi)外共生菌分別進行組成分析，菌群多樣性分析直觀的展示出滸苔的共附生菌中都存在
5、一些與現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中序列的遺傳關(guān)系較遠的菌株。分析發(fā)現(xiàn)滸苔內(nèi)外共生菌中交替單胞菌占據(jù)優(yōu)勢，其次是chloroplast-norank和polaribacter4。更加表明，需要區(qū)別研究海藻的胞內(nèi)外細菌種類，并且滸苔周遭共生的細菌是他們在生存環(huán)境中互相選擇的結(jié)果。本文分離鑒定獲得了可培養(yǎng)的CFB菌株，利用抗生素法建立了滸苔無菌發(fā)育實驗體系，將用于菌株的MG（形態(tài)發(fā)生）功能驗證。分離純化培養(yǎng)得到可培養(yǎng)的滸苔胞外共生菌，用16SrDNA基因序列比對的方法鑒定了共生菌的種類分別是紅桿菌屬（Rhodobacteraceae）、海桿菌屬（Marinobacter
6、）、Marivita和Rosevirus，他們都曾是有文獻報道的可能是對滸苔的形態(tài)發(fā)生有著重要影響的細菌。為檢測滸苔外生菌對滸苔形態(tài)發(fā)生過程的影響，首先對實驗室培養(yǎng)的滸苔進行了外生菌的分離和純化，再應(yīng)用抗生素方法對滸苔藻體進行無菌化處理，觀察剛剛放散的滸苔的形態(tài)發(fā)生過程。在掃描電鏡下觀察到暫時的無菌狀態(tài)，在無菌條件下滸苔的形態(tài)發(fā)生變化，變得不規(guī)則且生長速度極慢，而隨著滸苔藻體的生長，葉片經(jīng)歷了從形態(tài)異常到較為正常的過程，并且無菌的死亡的藻體不會被降解。因此推測滸苔在生活史中出現(xiàn)的各種生存的形態(tài)變化可能與附生菌有關(guān)。與此同時，得知與綠藻共生的一種黃桿
7、菌屬（Flavobacteria）可以分泌胞外酶，該酶可以降解綠藻細胞壁中的多糖從而得到功能寡糖，也因此發(fā)現(xiàn)該細菌是一個新的種屬[5]，之前未有報道過。基于對酶法制備寡糖的各種優(yōu)勢，我們想通過基因工程和蛋白質(zhì)工程的手段，人工合成胞外共生菌產(chǎn)生的酶蛋白的核酸序列，通過原核表達的方法將其異源表達出來，并比較不同原核表達載體和受體重組轉(zhuǎn)化表達石莼多糖裂解酶基因的效果。將人工合成的石莼多糖裂解酶基因片段分別酶切接入原核表達載體pColdⅠ質(zhì)粒和pET-28a(+)質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒pColdⅠ-859和pET-28a（+）-859（859代表石莼多糖裂解酶
8、基因），經(jīng)雙酶切測序鑒定后，分別4上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文將質(zhì)粒pColdⅠ-859轉(zhuǎn)入大腸桿菌RP（DE3）感受態(tài)細胞，
