Hedgehog通路對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲的調(diào)控作用研究

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1、分類號：R3單位代碼：10346密級：學(xué)號：2015111012044碩士學(xué)位論文中文論文題目：Hedgehog通路對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲的調(diào)控作用研究英文論文題目：TheregulationofHedgehogpathwayoninvasionofnon-smalllungcancercells申請人姓名：張鑫指導(dǎo)教師：王建秋專業(yè)名稱：人體解剖與組織胚胎學(xué)研究方向：分子細(xì)胞生物學(xué)所在學(xué)院：醫(yī)學(xué)院論文提交日期2018年3月Ｈｅｄｇｅｈｃ＾通路對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲的調(diào)粹作用研究論文作者簽名：泰指導(dǎo)教師簽名：論

2、文評閱人１：評閱人２：評閱人３：評閱人４：評閱人５：答辯委員會主席：１卷於委員１：來科委員２：你—干委員３：ｌｊ委員４：ｎ停，委員５：［答辯曰期：ＭＨ４；TheregulationofHedgehogpathwayoninvasionofnon-smalllungcancercellsAuthor’ssignature:Supervisor’ssignature:ExternalReviewers:ExaminingCommit

3、teeChairperson:ExaminingCommitteeMembers:Dateoforaldefence：杭州師范大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果：：他教杏機(jī)抝的ｅ份，也不包含為獲得杭州師范大學(xué)沌ａ或證書而使用過的材料一。與我同．丁作的同志對本研究所做的仟何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字口期：Ｗ抑Ｚ月十口學(xué)

4、位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解抗抑｜師范大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)杭州師范太學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字曰期法年Ｚ月曰簽字曰期：么）１＾：＜月曰Ｙ十致謝時光荏苒，三年的時光彈指一揮間?；叵雱倓傋哌M(jìn)師大時，仿佛是在昨日。非常慶幸在人生中最美的年華，走進(jìn)馬云老師眼中

5、“未來世界最好的一所大學(xué)”，度過一段難忘的時光。感謝我的導(dǎo)師王建秋老師對我的關(guān)懷和指導(dǎo)。導(dǎo)師仁愛，正直，作風(fēng)嚴(yán)謹(jǐn)，為我樹立了良好的榜樣。感謝導(dǎo)師的耐心與寬容，幫助我成長與進(jìn)步。感謝劉俊平老師為我們大家提供如此優(yōu)渥的實(shí)驗(yàn)環(huán)境。劉老師知識淵博，治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，為人親和，又有崇高的科研夢想，他一直是我們大家科研路上的引導(dǎo)者，是我們追隨的榜樣。感謝王立輝老師、李建峰老師、梁穎師姐、王剛師兄在我完成課題過程中給予的耐心指導(dǎo)和熱情幫助。感謝我的家人，我的爺爺奶奶，爸爸媽媽，感謝您們一直以來對我無私的愛與關(guān)懷。同時感謝林青等好朋友們，感謝你們一直以

6、來的陪伴與支持。你們讓我擁有無數(shù)個幸福的瞬間，歲月的腳步依然匆匆，但這三年的生活將永生難忘。在此，謹(jǐn)向所有關(guān)心和幫助過我的人表示最誠摯的感謝!最后，衷心感謝三年來杭師大醫(yī)學(xué)院及杭師大科技園對我的培養(yǎng)！感謝在百忙之中，抽出寶貴時間，評閱我論文的各位專家評委，在此衷心地說聲感謝，謝謝你們！I摘要研究目的:本研究通過構(gòu)建人Hedgehog通路關(guān)鍵分子SMO/GLI1過表達(dá)/低表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株，驗(yàn)證SMO和GLI1對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲的調(diào)控作用,并通過分析SMO/GLI1對肺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithylial-Mesen

7、chymalTransition,EMT)的調(diào)節(jié)作用，初步探討其調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲的分子機(jī)制。研究方法:（1）基于帶有HA或Flag標(biāo)簽的質(zhì)粒pcDNA3.1構(gòu)建人SMO和GLI1過表達(dá)載體，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染H1299和A549細(xì)胞，構(gòu)建SMO/GLI1過表達(dá)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株；設(shè)計(jì)并合成靶向人SMO/GLI1的小干擾RNA（siRNA），通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染上述兩種肺癌細(xì)胞，構(gòu)建基因敲低細(xì)胞株。通過熒光定量PCR及蛋白質(zhì)免疫印跡方法，檢測基因及蛋白水平過表達(dá)或敲低效果。（2）應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)，檢測SMO和GLI1過

8、表達(dá)/敲低對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲的影響。將濃度為1mg/ml的基質(zhì)膠(Matrigel)鋪于上室聚碳酸酯膜上，每孔50ul，待膠凝固后接種培養(yǎng)細(xì)胞16h后進(jìn)行固定及DAPI染色，熒光顯微鏡下每組隨機(jī)選擇5個視野進(jìn)行拍照，使用ImageJ軟件分析穿膜細(xì)胞數(shù)，以上室