資源描述：
《廣西鴨圓環(huán)病毒遺傳變異分析及cap蛋白的原核表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、分類號S墨55：3UDC碩士學位論文密級廣西鴨圓環(huán)病毒遺傳變異分析及Cap蛋白的原核表達粟艷瓊學科專業(yè)亟隨蓋醫(yī)堂指導教師塞垡椹盟究員論文答辯日期2Q!圣生§旦2墨旦學位授予日期——答辯委員會主席睦左童巫究員廣西大學學位論文原創(chuàng)性和使用授權聲明。f煳嬲本人聲明所呈交的論文，是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除己特另IJJjN以標注和致謝的地方外，論文不包．含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學或其它單位的學位而使用過的材料。與我一同工作的同事對本論文的研究工作所做的貢獻均已在論文中作了明確說明。本人在導師指導下所完成的學位
2、論文及相關的職務作品，知識產(chǎn)權歸屬廣西大學。本人授權廣西大學擁有學位論文的部分使用權，即：學校有權保存并向國家有關部門或機構送交學位論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復制手段保存、匯編學位論文。本學位論文屬于：口保密，在年解密后適用授權。b不保密。(請在以上相應方框內打“√”)篙主鞴論文作者簽名：糾“＼二指導教師簽名：參。＼1∥刀作者躲幅Ⅲ玷好尹日期：≯肜．“羅日期莎口肛．莎’／歹電子郵箱：勺2川／對汐形善，么刎廣西鴨圓環(huán)病毒遺傳變異分析及Cap蛋白的原核表達摘要鴨圓環(huán)病毒(Duck
3、circovirus，DuCV)主要是侵害宿主的免疫系統(tǒng)，而導致宿主免疫力低下，進而引發(fā)二重或多重感染，可給養(yǎng)殖業(yè)造成極大經(jīng)濟損失。然而由于DuCV發(fā)現(xiàn)較晚，又缺乏體外培養(yǎng)DuCV的方法，因此對其致病機理及危害的研究尚存在很多困難。為了解DuCV在廣西鴨群中流行和變異，以及危害程度，明確廣西DuCV的基因型及優(yōu)勢基因型，并為創(chuàng)建研制DuCV抗體快速檢測方法奠定基礎。本研究擬從廣西DuCV遺傳變異分析及Cap蛋白的原核表達兩個部分對廣西DuCV進行研究和分析。1、廣西DuCV遺傳變異分析本研究采取PCR擴增方法對2010--一2012年間廣西9市鴨群中2569份內臟組織樣品進行
4、了檢測，檢測出陽性樣品194份，陽性率為7．55％。其中，篩選部分陽性樣品進行基因組擴增和比對分析，共獲得14個DuCV全基因組序列?；蚪M大小為1993nt-～1995nt，與已報道的其他DuCV毒株基因組大小一致。14個DuCV廣西毒株彼此之間的同源性為93．5％～99．8％，與德國、美國、韓國分離株以及24個中國大陸毒株的同源性為T92．2％----99．6％，而與另外18個大陸地區(qū)毒株和4個臺灣毒株同源性僅為82．3％～86．2％。DuCV基因組內包含3個主要的開放閱讀框(Openreadingframe，ORF)：ORFV1／rep、ORFC1／cap和ORFC2，
5、所有14個廣西毒株在上述編碼區(qū)沒有核苷酸插入或者缺失現(xiàn)象。這14個廣西毒株Cap基因(ORFC1)長度均為774nt，編碼257個氨基酸。核苷酸序列同源性為89．5％～99．9％，氨基酸序列同源性為95．3％"-'100．O％。ORFC2長度均為237nt，編碼78個氨基酸。核苷酸序列同源性為96．6％---．100．O％，氨基酸序列同源性為91．1％'-一100．O％。Rep基因(ORFV1)長度均為879nt，編碼292個氨基酸。核苷酸序列同源性為95．9％～99．7％，氨基酸序列同源性為98．3％～100．0％。基于DuCV基因組遺傳進化樹分析顯示存在兩個明顯的分支即：
6、基因1型與基因2型。基因1型存在三個亞型即：基因1．1亞型、基因1．2亞型和基因1．3亞型。其中基因1．1亞型主要包括22個中國大陸毒株及一個德國毒株，基因1．2亞型則包括14個中國大陸毒株、一個美國毒株33753．52和4個韓國毒株，基因1．3亞型包括兩個中國大陸的毒株LJ07和LJ33。而基因2型也存在三個亞型即：基因2．1亞型、基因2．2亞型及基因2．3亞型。其中基因2．1亞型包括中國臺灣的四個毒株，基因2．2亞型為15個中國大陸毒株，基因2．3亞型為三個中國大陸毒株MH02．07、MHl1、HZ09。本研究所獲得的14個廣西毒株均屬于基因1型，其中Qz37-2012、
7、Qz04-2011、LZl1-09、FC35—2012、Qz36-2012、TD41—09、FC33．2012、FC34—2012、FC32—2012、NNl3．2012歸屬于基因1．1亞型，LZ01．2011、NNll-2012、NNl2—2012、PX08．2011歸屬于基因1．2亞型。DuCVCap蛋白的原核表達使用GeneDesigner2．0軟件(DNA2．0inc公司)對Cap基因進行分析和密碼子優(yōu)化，并在首尾分別加入BamI-II和SalI位點，且去除基因內部其余常見酶切位點。經(jīng)BamHI
