《磷脂轉(zhuǎn)運蛋白低表達對巨噬細胞炎癥因子的表達的影響及分子機制》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
圓碩士學位論文IIIIIIIIMIIUIIIWF2809090論文題目:磷脂轉(zhuǎn)運蛋白低表達對巨噬細胞炎癥因子的表達的影響及分子機制作者姓名:劉帥學科、專業(yè):病理學與病理生理學學位類型:科學學位研究方向:脂質(zhì)代謝與動脈粥樣硬化指導教師:秦樹存教授入學時間:2010年9月論文工作起止時間:2011年7月~2013年2月 目錄中文摘要???????????????????????????????????1英文摘要??????????????????????????????????·5符號說明??·—1上.—jL-刖舌????????????材料與方法????????????????????????????????··14結(jié)果???????????????????????????????“??????????··40討論?????????????????????????????????????????????·42結(jié)論?????????????????????????????????????????????·45附表?????????????????????????????????????????????·46參考文獻???????????????????????????????????·53綜j苤???????????????”?????????????????????????????··57致謝?????????????????????????????????????????????·69原創(chuàng)性聲明?????????????“ \㈣嬲磷脂轉(zhuǎn)運蛋白低表達對巨噬細胞炎癥因子表達的影響及分子機制研究生:劉帥專業(yè):病理學與病理生理學導師:秦樹存教授中文摘要目的炎癥(inflammation)在人類多種重要疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的作用。巨噬細胞(macrophage)作為一種免疫細胞,在炎癥的多個環(huán)節(jié)起到重要作用。核轉(zhuǎn)錄因子r.B(nucleusfactorkappa-B,NFrB)是巨噬細胞參與的炎癥信號通路中最重要的轉(zhuǎn)錄因子之一,它的激活能引起多種炎癥因子如白細胞介素(interleukin)、腫瘤壞死因子a(tumornecrosisfactorQ,TNF一伐)等表達升高。磷脂轉(zhuǎn)運蛋圭t(phospholipidtransferprotein,PLTP)參與炎癥發(fā)生發(fā)展過程,PLTP能結(jié)合、轉(zhuǎn)運以及中和脂多糖(1ip.polysaccharide,LPS),PLTP缺乏dx鼠(PLTP-/一)在致死劑量的內(nèi)毒素血癥時血漿炎癥因子表達升高,器官損傷加重,死亡率增加。該過程中高表達的炎癥因子均受NFr.B調(diào)控,且在巨噬細胞內(nèi)均有表達,提示上述炎癥因子表達升高很可能與巨噬細胞NFr..B激活相關(guān)。本研究擬采用多種巨噬細胞為模型,探討PLTP低表達或不表達對LPS刺激的影響及可能的分子機制。方法1、小鼠繁育,PLTP敲除雜合子為親代,繁育出子代經(jīng)基因型鑒定得到純合子PLTP./.及同窩出生野生型小(wildtypemic,WT)。從中選取雄性WT和PLTP-/.各8只。2i小鼠第八周齡時,提取LPS誘導的腹腔巨噬細胞,分離骨髓進行原代培養(yǎng),并添加含集落刺激因子的Lcell培養(yǎng)基進行誘導。培養(yǎng)十天左右,骨髓源性巨噬細胞(bonemalTOWderivedmacrophage,BMDM)誘導完成。3、培養(yǎng)巨噬細胞模型RAW264.7、人臍靜脈上皮細胞(Humanumbilicalveinepithelialcell,HUVEC),分為三組分別為空白組(標記為blank)、對照組(標記為ControlsiRNA)和實驗組(標記為PLTPsiRNA)。 4、將WT和PLTP./.BMDM兩種細胞分別在不同的時間段(分別為0.5h,lh,2h)給予LPS(濃度為200ng/m1)刺激。5、將PLTPsiRNARAW264.7在不同的時間段(分別為O.5h,lh,2h)給予LPS(濃度為200ng/m1)刺激。6、將PLTPsiRNAHUVEC在不同的時間段(分別為O.5h,lh,2h)給予TNF-0【(濃度為20ng/m1)刺激。7、WesternBlot檢測與NFr.B信號通路相關(guān)蛋白;NFr._B活性亞單位p65、胞漿內(nèi)抑制亞單位Iv/3.a(chǎn)、信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signaltransducersandactivatorsoftranscription3,STAT3)及其磷酸化蛋f蘭t(pSTAT3)、轉(zhuǎn)錄生長因子激酶1(transformgrowthfactoractivatedkinase1,TAKl)及其磷酸化蛋白(pTAKI),核蛋白內(nèi)參H3以及胞漿蛋白內(nèi)參甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)。8、實時熒光定量PCR(Real.Time.PCR)技術(shù)檢測細胞中相關(guān)炎癥因子IL.6、IL一10、TNF.a(chǎn)和干擾素.7(interferon.Y,IFN一7)mRNA的表達。9、酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme.1inkedimmunosorbentassay)檢測BNDM培養(yǎng)基中IL.6、IL.10、TNF.a(chǎn)和IFN.Y‘含量。10、免疫熒光染色技術(shù)檢測核蛋白‘p65轉(zhuǎn)位。結(jié)果1、LPS刺激下腹腔巨噬細胞及原代巨噬細胞炎癥因子表達的實驗結(jié)果;(1)PLTP-/.腹腔巨噬細胞炎癥因子IL.10、IFN吖、TNF.Q和IL.6的mRNA的表達均較WT顯著升高(尸
此文檔下載收益歸作者所有