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《plk激酶家族新成員plk5克隆、表達(dá)以及初步功能分析論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、浙迤太堂亟±堂僮進(jìn)童英文縮寫APCBSAcDNADMS0D訂EDTAESTGTBPsNCBINudCMKlp2MPFMTTPAGEPBSPBDPCRPLKPMSFPVDFSDSTEMEDTris英文縮寫一覽表英文名稱anaphase-promotingcomplexbovineserBmalbumincomplementaryDNAdimcnthylsulphoxidedithiothureitolethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalExpresse
2、dsequencetags‘／-tublincomplexbindingproteinsnationalcenterofbiotechnologyinformationnucleardistributiongeneCmitoticKinesin-likeprotein2maturationpromotingfactor3-(4，5-dimenthylthiazol·2-y1)-2，5polyacrylamidegelelectrophoresisphosphate-bufferedsalinep
3、olo-boxdomainpolymerasechainreactionpolo-likekinascphenylmethylsulfonylfluoridepolyvinylidenedifluoridemembranesodiumdodecylsulfateN，N，N。'N'-Tetramethylethylenediaminetrishydroxymethylaminomethane逝匹太堂亟±堂位途室PLK激酶家族新成員PLK5的克隆、表達(dá)以及初步功能分析浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)與病理生理學(xué)
4、碩士研究生應(yīng)莉莎導(dǎo)師周天華中文摘要Poloqmekinase(PLK)家族是一類高度保守的絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶，在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。目前已在哺乳類細(xì)胞中鑒定出4個PLK，分別是：Polo—likekinasel(PLKl)，Polo-likekinase2／SNK(scax,n·inducible虹nase)，Polo．1ikekinase3／FNK／PRK(fibroblast-growth-faetor-induciblekina或proliferationrelatedk
5、inase)及Polo．1ikekinase4／SAK(SNKakinzinase)。PLKl及其同源蛋白在細(xì)胞周期的不同時相中，都有十分重要的作用：如在G2晚期／M初期參與激活CyclinB／CDKI復(fù)合體，使細(xì)胞進(jìn)入M期，協(xié)助中心體的功能成熟以及雙極紡錘體的形成，活化細(xì)胞分裂后期促進(jìn)復(fù)合體(anaptme·promotingcomplex,APC)，促進(jìn)染色體正常分離，分配；決定細(xì)胞能否按期退出M期及調(diào)節(jié)而進(jìn)入胞質(zhì)分裂等事件。PLK2在G1期中表達(dá)最高，可能參與調(diào)控細(xì)胞進(jìn)入s期。PLK3主要
6、在S期和G2期表達(dá)，可能參與DNA損傷檢查點(diǎn)信號通路和細(xì)胞進(jìn)入S期。而PLK4則主要與有絲分裂的退出有關(guān)。同時，PLK家族與腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，是一個很有前景的抗癌藥物靶點(diǎn)，其小分子化合物抑制劑已經(jīng)進(jìn)入臨床I期實(shí)驗(yàn)。人們在研究以上四個PLK家族成員的同時，也一直在關(guān)注該激酶家族中是否還存在其它新成員，及其在細(xì)胞周期調(diào)控中的作用。然而自1997年以來，再也沒有新的PLK基因被克隆的報道，在最新的人類蛋白激酶圖譜中也沒有新的PLK記錄。我們綜合應(yīng)用生物信息學(xué)和RT-PCR等方法，在小鼠中克隆了
7、一種未知基因，其N端具有一個與PLK家族催化結(jié)構(gòu)域高度同源的激酶結(jié)構(gòu)域(Kinasedomain)，C端則有PLK家族特征性Polo-box結(jié)構(gòu)域(polo—boxdomain,PBD)，2塹琶叁堂亟±堂魚論塞序列同源性分析顯示該基因所編碼的蛋白與PLKl的相似性為53％，同源性為33％，這比PLK4與PLKl的相似性(32％)和同源性(16％)還高。因而，我們初步將其歸為PLK激酶家族的新成員，并命名為MousePolo-likekinase5(mPLK5，mammalianPLK5)。我們通
8、過生物信息學(xué)分析，RT-PCR、原位雜交、細(xì)胞免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)等分子細(xì)胞生物學(xué)方法和現(xiàn)代成像技術(shù)，對mPLK5的一些基本生化特征，組織表達(dá)、分布，亞細(xì)胞定位以及功能進(jìn)行了初步的研究。我們期望通過對這個新基因的深入研究，進(jìn)一步明確PLK家族在細(xì)胞周期調(diào)控中所發(fā)揮的作用，并為細(xì)胞周期調(diào)控異常的疾病(如腫瘤)提供新的治療靶點(diǎn)。結(jié)果：1、生物信息學(xué)初步分析提示：小鼠PLK5eDNA為2089Up，定位于第10號染色體上。它含有兩個保守的結(jié)構(gòu)域：其N端具有一個與PLK家族催化結(jié)構(gòu)域高度同
