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1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)號：1101509029黃瓜果瘤基因Tu的遺傳轉(zhuǎn)化研究及黃瓜無側(cè)枝基因nlb的初步定位學(xué)科專業(yè)：作物遺傳育種作者姓名：任國良指導(dǎo)老師：潘俊松副教授蔡潤教授學(xué)號：1101509029班級：B1015091日期：2013年02月萬方數(shù)據(jù)MasterDissertationofShanghaiJiaoTongUniversityTheResearchonGeneticTransformationofTuberculateFruitGeneTuinCucumber(cucumissativusL.)andGeneMappingofNon-lateral-branc
2、hGenenlbinCucumber(CucumissativusL.)Specialty:CropGeneticsandBreedingAuthor:GuoliangRenAdvisor:A.Prof.JunsongPanProf.RunCaiSchoolofAgriculturalandBiologicalShanghaiJiaoTongUniversityFebruary,2013萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的
3、作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密?。（請在以上方框內(nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期
4、：年月日萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要黃瓜果瘤基因Tu的遺傳轉(zhuǎn)化研究及黃瓜無側(cè)枝基因nlb的初步定位摘要本實驗室通過前面的研究，利用圖位克隆的方法克隆得到控制黃瓜果瘤性狀的基因Tu，且發(fā)現(xiàn)Tu基因的完全缺失導(dǎo)致無果瘤性狀的發(fā)生。生物信息學(xué)軟件預(yù)測該基因編碼鋅指蛋白(zincfingerprotein)轉(zhuǎn)錄因子，為了進一步驗證Tu基因的生物學(xué)功能，探究該轉(zhuǎn)錄因子在黃瓜轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的重要作用，故對其進行黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化研究。以黃瓜無果瘤品系S06苗齡子葉節(jié)為外植體，構(gòu)建含有黃瓜自身啟動子的黃瓜果瘤基因Tu表達(dá)載體pCAMBIA2301-Tu，將表達(dá)載體通過點擊法導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌菌株GV3
5、101中，進行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黃瓜果瘤基因Tu的遺傳轉(zhuǎn)化研究。通過優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化的生根條件以及抑制農(nóng)桿菌生長條件等，將生根培養(yǎng)中卡那霉素(Kan)濃度調(diào)至30mg/L，抑制農(nóng)桿菌生長抗生素為特美汀(Ti)150mg/L+頭孢霉素(Cef)100mg/L時，一定程度上提高了遺傳轉(zhuǎn)化的效率。580個外植體通過抗生素篩選獲得的18株再生苗，通過PCR檢測和測序鑒定，最終獲得8株轉(zhuǎn)化苗，轉(zhuǎn)化效率為1.37%。以黃瓜(CucumissativusL.)無側(cè)枝品系419(P1)和長側(cè)枝品系SB-2(P2)為親本，構(gòu)建136株F2群體為試驗材料，對黃瓜無側(cè)枝基因nlb進行基因定位研究。田間調(diào)查和遺傳分
6、析發(fā)現(xiàn)F2群體的表現(xiàn)型為長側(cè)枝與無側(cè)枝，χ2(χ2=0.04＜3.84)檢驗表明其分離比為31∶。運用分離群體分組混合分析法(bulkedsegregantanalysis,BSA),從F2中無側(cè)枝群體和長側(cè)枝群體中隨機選取10株，分別混合其DNA，構(gòu)建無側(cè)枝和有側(cè)枝基因池，通過分析SSR分子標(biāo)記在基因池間的多態(tài)性，定位到nlb基因連I萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要鎖標(biāo)記SSR10018，將nlb定位于黃瓜第一染色體。然后利用F2群體進行進一步驗證，經(jīng)MAPMAKER3.0軟件分析，定位到距nlb基因更加緊密的分子標(biāo)記SSR19673，遺傳距離為15.9cM。本研究為無側(cè)枝基
7、因nlb的精細(xì)定位和圖位克隆提供良好的研究基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：黃瓜，果瘤基因Tu，遺傳轉(zhuǎn)化，無側(cè)枝基因nlb，基因定位II萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要TheResearchonGeneticTransformationofTuberculateFruitGeneTuinCucumber(cucumissativusL.)andGeneMappingofNon-lateral-branchGenenlbinCucumber(CucumissativusL.)Abstr
