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《經鼻腔移植缺氧預處理的骨髓間充質干細胞對于小鼠腦出血作用的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、導師單位：首都醫(yī)科大學附屬北京友誼醫(yī)院完成日期：二○一五年五月首都醫(yī)科大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。作者簽名：日期：年月日導師簽名：日期：年月日首都醫(yī)科大學博士學位論文目錄中文摘要……………………………………………………………………2英文摘要…
2、…………………………………………………………………4前言（引言、序言）………………………………………………………7正文（包括材料、方法、結果、討論、結論等部分）第一部分：腦出血模型的建立……………………………………………7第二部分：缺氧預處理骨髓間充質干細胞………………………………17第三部分：經鼻腔移植缺氧預處理骨髓間充質干細胞…………………29第四部分：經鼻腔移植缺氧預處理骨髓間充質干細胞對于小鼠腦出血神經功能作用的影響及機制的研究……………………41結論…………………………………………………………
3、………………51文獻綜述……………………………………………………………………58參考文獻……………………………………………………………………63附錄…………………………………………………………………………71攻讀學位期間發(fā)表文章情況………………………………………………72致謝…………………………………………………………………………73個人簡歷……………………………………………………………………741首都醫(yī)科大學博士學位論文中文摘要研究背景腦出血占全部腦卒中的10%-15%，具有很高的死亡率及致殘率，對患
4、者、家庭及社會均可造成極大的負面影響和經濟負擔。目前，尚沒有美國FDA批準的用于治療腦出血的有效藥物。近年來，干細胞移植已經成為治療多種神經系統(tǒng)疾病的臨床研究熱點，用于腦出血的治療亦逐漸受到研究者的關注。骨髓間充質干細胞（Bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs）是目前研究最多的一種干細胞。BMSCs具有向三個胚層分化的潛能，可自體取材移植，不需要組織配型、無免疫排斥等諸多問題，同時因其致癌性較低、來源豐富、培養(yǎng)條件相對簡單等優(yōu)勢而成為研究熱點。但是，對于治療不同的疾病，
5、如何選擇適宜的BMSCs移植途徑、劑量和時間，以及治療的遠期效果等問題還在不斷的研究探索中。研究目的通過在體和離體實驗，探討經鼻腔途徑移植缺氧預處理的骨髓間充質干細胞對小鼠腦出血的治療作用及相關機制。實驗方法實驗共分為4個部分。1．建立小鼠腦出血模型：用不同劑量的膠原酶IV立體定向注射至小鼠腦基底節(jié)區(qū)，采用病理解剖及行為學方法檢測腦出血模型成功與否。2．缺氧預處理BMSCs：取原代培養(yǎng)BMSCs，置入氧氣濃度為0.5%的容器中24小時，應用MTT法檢測缺氧預處理后的細胞活性，劃痕試驗檢測細胞的遷移能力，
6、Westernblot技術檢測相關血管及神經生長因子的表達。3．檢測經鼻腔途徑移植的HP-BMSCs：經鼻腔途徑給予HP-BMSCs，熒光顯微鏡下沿嗅球、大腦皮層、血腫周圍尋找熒光標記的HP-BMSCs，驗證該方法的可靠性。4．應用神經行為學、免疫組化及免疫印記等技術驗證HP-BMSCs移植治療效果：實驗動物隨機分為假手術組，對照組及治療組。全部實驗小鼠在建模前均進行行為學訓練。（1）神經行為學檢測方法包括mNss、Rotarod、貼紙去除實驗以及曠場試驗，分別檢測不同時間點經鼻腔移植HP-BMSCs對
7、于小鼠行為學的變化；（2）采用Westernblot技術檢測血腫灶周圍神經生長因子，包括血管內皮生長因子（VasclarEndothelialGrowthFactor，VEGF）、腦源性神經生長因子（Brain-DerivedNerotrophicFactor，BDNF）和膠質細胞源2首都醫(yī)科大學博士學位論文性神經生長因子（Glialcellline-DerivedNeurotrophicFactor，GDNF）的表達情況；（3）應用免疫組織化學技術檢測側腦室下區(qū)（SubventriclarZone，S
8、VZ）神經母細胞遷移和血腫灶周圍新生神經元情況；（4）以Nissl染色技術評估小鼠腦出血后的病理改變。實驗結果1．以0.03U膠原酶IV立體定向注射至小鼠基底節(jié)區(qū)，腦出血模型穩(wěn)定，神經功能缺損癥狀明顯，死亡率低。2．經缺氧預處理的BMSCs細胞活性及遷移能力明顯增強，與對照組相比，BMSCs的促紅細胞生成素（Erythropoietin，EPO），促紅細胞生成素受體（Erythropoietin，receptor，EPOR）基質細胞衍生因子
