骨保護素對破骨細胞及其前體黏附結(jié)構(gòu)和融合的影響

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1、＇八已［Ｍ２０４７ＪｌＩ？ｔ來皺＿據(jù)叫大聲ＹＡＮＧ／ＨＯＬＩＵＮ＂ＩＶＥＲＳＩＴＹ―‘；‘，巧皆博壬學(xué)化４＾丈賓，名骨保護素對破骨細胞及其前體黏附結(jié)構(gòu)和融合的影響■＼：‘為，ｖ去言張，＇；謹剩連權(quán)■—趙鴻雁苗，錐，；巧議ｙ辨哪－巧壤Ｕ指導(dǎo)教師姓名：劉宗平教授，揚州大學(xué)，江蘇揚州，２２５００９乎連＇中請學(xué)位級別：博壬學(xué)科專業(yè)名稱：略床獸醫(yī)學(xué)論文提交日期：２０１５年４月論文答辯日期：２０１５年６月學(xué)位授予單位：揚州大學(xué)學(xué)位授予日期：２０１５年６月

2、答辯委員會主席‘：＾馬，＇，；知對取々１：＞５々識？’換矣扛兵護，為隸禱鏈２＇＂５年＂鑛骨保護素對破骨細胞及其前體熱附結(jié)構(gòu)和融合的影響Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ６ｓｔｅｏｐｒｏｆ：ｅｇｅｒｉｎｏｎｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌａｄｈｅｓｉｖｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄｆｕｓｉｏｎｏｆｒｅｏｓｔ：ｅｏｃＩａｓｔｓ（ｐ）研究生；趙鴻雁導(dǎo)師；劉宗平教授Ｘ｜備；專業(yè)｜床獸區(qū)學(xué)資助項目；國家自然科學(xué)基金（３１１７２３７３，３１３７２４９５）江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計

3、劃資助項目（２０１３）揚州大學(xué)２０１５年６月趙鴻雁：骨保護素對破骨細胞及其前體黏附結(jié)構(gòu)和融合的影響１＿骨保護素對破骨細胞及其前體黏附結(jié)構(gòu)和融合的影響中文摘要一骨內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡是動物主要的健康問題之。破骨細胞的分化和活化，在健康動物及患病動物骨重塑中起著至關(guān)重要的作用。破骨細胞具有骨吸收活性，由單核細胞巨隨細胞／一單核細胞譜系的造血前體細胞融合形成，。破曾細胞通過偽足小體種特異性的黏附結(jié)構(gòu)，Ｆ－ａｃ附著在細胞外基質(zhì)上。偽足小體可形成ｔｉｎ環(huán)，類似于進行胥吸收的破骨細胞形成的環(huán)狀封閉帶。曾保護素（ＯＰＧ）和

4、核因子ｋＢ受體激活劑（ＲＡＮＫ）都是腫瘤壞死因子受體（ＴＮＦＲ）超家族成員，通過和ＲＡＮＫ配體（ＲＡＮＫＬ）競爭性地結(jié)合，調(diào)控破骨細胞形成和功能。ＲＡＮＫＬ通過激活ＲＡＮＫ，促進破骨細胞分化；而ＯＰＧ連接至ＲＡＮＫＬ，抑制破骨細胞形成一。己有研究發(fā)現(xiàn)了ＯＰＧ作用于破骨細胞分化、融合及黏附的些重要細節(jié)。但送些研究主要集中在編碼破骨細胞特異性標志物，潛在的融合因子和黏附相關(guān)調(diào)控因子基因的表達，通過體外阻斷，或過表達方式來研究，ＯＰ。因此Ｇ抑制破骨細胞分化、融合和黏附的許多重要分子機制仍不明確ｎ－。本研究Ｗ２５ｇ／ｍＬ

5、ＭＣＳＦ和３０ｎｇ／ｍＬＲＡＮＫＬ誘導(dǎo)ＲＡＷ２６４．７細胞分化形成的破骨細胞為研究對象，在分化過程中添加不同濃度ＯＰＧ進行處理，ＲＴＣＡ）、免疫印跡法ｅｓｅｒｎｂｏ通過形態(tài)學(xué)鑒定、實時細胞動態(tài)分析（（Ｗｔｌｔ）等技一術(shù)手段，探索ＯＰＧ對破骨細胞黏附結(jié)構(gòu)和融合的影響，，揭示相關(guān)調(diào)控機制為進步闡明ＯＰＧ對破骨細胞形成及功能的抑制作用提供了理論依據(jù)。研究內(nèi)容如下：１．ＯＰＧ對不同分化階段破骨細胞的形成及功能的影響為了研究０ＰＧ對不同分化階段破骨細胞的黏附及活性的影響－，本實驗采用ＭＣＳＦ和ＲＡＮＫＸ處理ＲＡＷ２６４．

6、７細胞，培養(yǎng)１、３、５、７ｄ后，各組分別添加８０ｎｇ／ｍＬＯＰＧ作用２４ｈ?？咕剖崴嵝憎胨崦福ǎ裕遥粒校┤旧兔庖哂⒐鈾z視ｉｊ破骨細胞分化和點附能力的變化，民ＴＣＡ監(jiān)測細胞生長曲線變化，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測ＴＲＡＰ、ＲＡＮＫ、ｉｎｔｅｇｒｉｎｐ３、ｍａｔｒｉｘｍｅｔ組ｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ９（ＭＭＰ９）、ｏａｔｈ巧ｓｉｎＫ、ｃａｒｂｏｎｉｃａｎｈｙｄｒａｓｅＩＩ（ＣＡＩＩ）及＾－－－ｖｅｓｉｃｕｌａｒｔｅＨＡＴＰａｓｅＡ１（ＶＡＴＰａｓｅＡｌ）蛋白表達量的。結(jié)果顯示ｙｐ變化，ＯＰＧ處理顯

7、著增強分化初期細胞（Ｉｄ）的存活、增巧及黏附能力，并促進ＲＡＮＫ和ｉｎｔｅｒｉｎ３３表達量ｇ｜顯著增高＜－（ｐ＾０１）。相反，和對照組相比，ＯＰＧ抑制成熟的破骨細胞（３７ｄ）的分化及黏附結(jié)構(gòu)的形成，并顯著降低了ＴＲＡＰ、ＲＡＮＫ、ｉｎｔｅｇｒｉｎｐ３、ＭＭＰ９、ｃａ也ｅｐｓｉｎＫ、ＣＡＩＩＨ揚州人巧障十學(xué)位論文－ＡＴＰａｓｅ＜及ＶＡ１標志性蛋白的表達水平（０．０１）。說明ＯＰＧ對于破骨細胞分化不同階段Ｐ的生物效應(yīng)是有差異的，，促進破骨細胞前體的黏附和存活抑制各階段破骨細胞的分化，并降低分化至中末期的成熟的

8、破骨細胞活性。２．ＯＰＧ對破骨細胞黏附結(jié)構(gòu)的影響及調(diào)控機理為了揭示ＯＰＧ對破骨細胞黏附結(jié)構(gòu)、黏附相關(guān)蛋白表達及分化的影響，本實驗采用－Ｃ